【摘 要】
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本研究从醉鱼草茎部分离获得1株内生细菌ZJ1,以多种供试植物病原菌为指示菌进行抑菌活性测定,发现均有不同程度的抑制作用。通过对该菌株的抑菌特性、分类地位、发酵条件、代谢物稳定性、抗菌物质种类、促生特性进行系统研究,以期为绿色农药的开发及利用提供新的菌种信息。主要内容如下:1.采用四点平板对峙法和生长速率法,测定ZJ1菌株及其发酵液对于10种供试病原真菌的抑菌作用,结果发现醉鱼草内生菌株ZJ1对10
【基金项目】
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山西省植物内生菌资源共享服务平台项目（201605D121024）； 山西省绿色生物农药工程技术研究中心；
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本研究从醉鱼草茎部分离获得1株内生细菌ZJ1,以多种供试植物病原菌为指示菌进行抑菌活性测定,发现均有不同程度的抑制作用。通过对该菌株的抑菌特性、分类地位、发酵条件、代谢物稳定性、抗菌物质种类、促生特性进行系统研究,以期为绿色农药的开发及利用提供新的菌种信息。主要内容如下:1.采用四点平板对峙法和生长速率法,测定ZJ1菌株及其发酵液对于10种供试病原真菌的抑菌作用,结果发现醉鱼草内生菌株ZJ1对10种供试病原菌均有一定抑制作用,其中,对桃褐腐病菌（M.fructicola）、番茄灰霉病菌（B.cinerea）、胡萝卜褐腐病菌（L.libanotis）和核桃腐烂病菌（M.Laxa）的抑制率较高。2.采用形态学观察、生理生化鉴定并辅以分子生物学鉴定,通过16S r RNA序列比对,ZJ1菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus sp.B-1-30和Bacillus sp.A-3-7B的同源性达100%,亲缘关系最近。可将菌株ZJ1初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。3.采用比浊法测定内生细菌ZJ1的的生长曲线,结果发现,菌株ZJ1的菌体生长量呈先迅速增加后衰退的趋势。以单因素对其发酵条件进行优化,经筛选,YSP基础培养基为最佳基础培养液,乳糖为菌株ZJ1的最佳C源,牛肉膏+酵母粉+蛋白胨为最佳N源,28～30℃为最佳发酵温度。通过正交试验,结合其方差分析和成本,选择p H7.0,装液量100/500 m L,接种量1%,转速190 r·min-1,发酵时间72 h为ZJ1菌株的最佳发酵条件。4.对ZJ1菌株代谢物的稳定性进行测定,结果发现菌株ZJ1抑菌物质有良好的热稳定性及酸碱稳定性,且对紫外光和自然光照射不敏感,可以耐受较长时间贮存。5.对内生细菌ZJ1代谢物的排油性和液滴坍塌特性进行测定,发现其具有排油能力且出现液滴坍塌现象,推测内生细菌ZJ1的代谢物中含有脂肽类化合物。使用中压层析对ZJ1的抗菌物质粗提物进行分离纯化,并使用LC-MS对其进行质谱鉴定,验证后得知菌株ZJ1可产生脂肽类抗菌物质。6.利用显微观察及电导率法对供试B.cinerea菌丝生长状态和细胞膜的通透性进行测定,结果发现经菌株ZJ1代谢物处理后,B.cinerea菌丝极少产孢,生长异常,发生断裂;随着处理时间延长,B.cinerea细胞膜通透性增大,渗透物质流出,电导率上升。7.通过种子萌发试验和灌根法对ZJ1菌株代谢物对番茄幼苗的促生作用进行测定,结果发现ZJ1菌株发酵液稀释100X时可以提高番茄种子的发芽率、50X时对植株的生长情况和保护酶活性的诱导效果最佳;对番茄果实的离体防效结果显示,ZJ1菌株发酵液也对A.solani有一定的预防作用。
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