目的:通过检测、鉴定与猪的类补体受体I型（CR1-like）相互结合的红细胞膜蛋白分子,探讨猪CR1-like分布于红细胞膜上的分子基础,以期为课题组后期研究“猪红细胞CR1-like分布状态影响免疫粘附功能的分子机理”提供理论支持。方法:本试验以健康长白仔猪为研究动物进行试验。试验方法如下:1)制备猪红细胞CR1-like免疫磁珠,运用免疫沉淀技术从猪红细胞膜蛋白样品中分离、纯化出CR1-like及其膜结合复合物,以SDS-PAGE、Western blot技术对分离结果进行鉴定。2)用质谱技术鉴定CR1-like免疫沉淀复合物的成分,对质谱结果进行亚细胞定位、分子功能注释、结构域等生物信息学分析,根据分析结果确定猪红细胞CR1-like膜结合候选蛋白分子。3)利用Western blot技术对红细胞膜总蛋白样品及CR1-like免疫沉淀复合物样品中的红细胞膜蛋白4.1分子（EPB41）进行检测。4)以EPB41基因CDS区序列为模板设计引物,对猪血液c DNA进行扩增,琼脂糖凝胶电泳检测,切取目的条带测序并合成该段序列。5)构建CR1-like及EPB41重组质粒,利用瞬时共转染技术将CR1-like、EPB41重组质粒转入HEK293t细胞中。细胞培养24 h后,提取细胞样品的总蛋白,以免疫共沉淀、Western blot技术体外验证CR1-like与EPB41的相互作用。结果:1)CR1-like免疫沉淀复合物经还原性SDS-PAGE检测,结果可见3条明显的蛋白条带,蛋白分子量依次为163.178±1.518 k Da,49.921±0.378 k Da,22.088±0.049k Da;而非还原性SDS-PAGE检测结果可见2条蛋白条带,蛋白分子量依次为284.751±14.347 k Da、199.280±0.947 k Da。2)CR1-like免疫沉淀复合物经质谱检测,共筛选出117个候选蛋白,经生物信息学分析及评价,确定评估分数最高的EPB41分子为候选蛋白进行后续试验。3)Western blot对红细胞膜总蛋白样品及CR1-like免疫沉淀复合物样品中的EPB41分子进行检测,结果可见大小约为83.49 k Da,64.21 k Da的印迹条带。4)琼脂糖凝胶电泳检测EPB41片段,结果可见单一条带,大小为228 bp,符合预期。5)转染CR1-like、EPB41重组质粒的HEK293t细胞经Western blot技术检测,结果显示CR1-like与EPB41分子存在相互作用。结论:1)成功建立免疫磁珠沉淀猪红细胞CR1-like复合物的方法。2)猪CR1-like通过结合EPB41分子进而分布于猪红细胞膜表面。