【摘 要】
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该研究根据GenBank登录的猪肺炎支原体（Mhp）232株P97基因（MHU50901,3723bp）和J株粘附因子基因（AF001398,3480bp）,设计了一对引物,以Mhp国际标准株（J株）、168株三个不同代次菌株（168F、
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该研究根据GenBank登录的猪肺炎支原体（Mhp）232株P97基因（MHU50901,3723bp）和J株粘附因子基因（AF001398,3480bp）,设计了一对引物,以Mhp国际标准株（J株）、168株三个不同代次菌株（168F<,99>、168F<,339>、168F<,485>）及Z株（强毒）基因组DNA为模板,通过PCR方法成功地扩增了Mhp P97基因的部分序列.测序结果表明,毒力不同的三个代次的168弱毒株及强毒Z株推导性氨基酸均含有相同的11个5aa（AAKPV/E）的R1区和3个10aa（GAPNQGKKAE）的R2区,J株有9个5aa的R1区和5个10ss的R2区,这一现象说明猪肺炎支原体的毒力强弱不一定与重复单元的多少有关.以已测序序列为参考,设计了一对带有酶切位点EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ的引物,并通过引物的定点突变,利用PCR方法扩增了Z株P97基因的抗原决定簇（R1R2区）,扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32a（+）中.重组质粒经酶切分析和PCR分析,带有正确阅读框架的重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE<,3>）感受态细胞,在37℃下,经IPTG诱导进行表达,得到了一分子量约29kDa的融合蛋白.表达量约11﹪,实现了较好的表达,从而为Mhp基因工程疫苗的研制奠定了基础.
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