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兔多杀性巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P.multocida）引起的一种急性败血性传染病,是家兔最重要的传染病之一。该病以急性出血性败血症为主要特征,还可出现鼻炎、肺炎、结膜炎等症状。在全球大多数国家和地区都有兔巴氏杆菌病的报道,给家兔养殖业造成较大的经济损失。由于抗生素的限制使用,细菌性疾病对养殖业的威胁日趋严重。本研究首先建立了 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测P.multocida的方法,并将此方法应用于P.multocida对兔的致病性研究,确实其在体内的定殖情况。先天性免疫系统是机体抵御病原微生物入侵的第一道防线。NOD样受体（Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors,NLRs）是模式识别受体（Pattern recognition receptors,PRRs）中一个重要的家族,是介导炎症反应以清除病原微生物的关键因子。基于此,本研究通过体内、体外试验,围绕P.multocida感染后激活的炎症反应展开研究。探究兔NLRC3（rNLRC3）受体在P.multocida感染过程中的调控机制,以及对P.multocida增殖作用的影响,对进一步研究其是否能够作为一种新型药物或作用靶点提供研究基础。1.多杀性巴氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及对兔的致病性研究本研究根据P.multocida的16S rRNA基因序列设计了特异性引物,建立qRT-PCR的标准曲线和溶解曲线,结果显示标准曲线方程为Y=-3.119X+31.4,目的基因的扩增效率为1.127,相关系数为0.9889,溶解曲线存在单一峰;特异性试验结果显示此方法能特异性检测P.multocida;敏感性试验结果显示此方法的最低检测限为1.78×101 CFU/mL,比普通PCR方法敏感性提高了约100倍;重复性试验结果显示组内变异系数和组间变异系数为变异系数均小于2%。为了探究P.multocida对兔的致病性,本研究通过颈部皮下注射106 CFU/只的P.multocida进行攻毒试验,观察兔的临床症状、病理变化,并利用建立的qRT-PCR检测方法,检测攻毒后细菌在各组织器官中的含量和分布。结果显示攻毒组表现为呼吸道症状,呼吸困难,有浆液性鼻液。感染后第二天死亡率达到峰值（40%）。剖检可见肺脓肿,实变;气管环出血;胸腺有明显出血点。病理组织切片观察到肺水肿,有中性粒细胞浸润;气管粘膜上皮细胞坏死脱落,气管环充血;胸腺中淋巴细胞数量减少且出现细胞坏死的现象。qRT-PCR结果显示在攻毒后第2天大部分组织中的载菌量达到最高,且细菌含量从多到少依次为脾、肝、胸腺、心、肺、肾,攻毒后第3天细菌含量开始降低。通过qRT-PCR检测攻毒后胸腺、肺和肾中炎症因子和模式识别受体的表达量变化。结果显示,炎症因子IL-1β、IL-6和IL-8表达量在所有被检组织中均显著上调（P＜0.05）,其中在攻毒后第2天炎症因子的表达量达到最高,随后开始降低。TLR2和TLR4的表达量在感染后显著上调（P＜0.05）,表明P.multocida激活了TLR2和TLR4介导的炎症反应。rNLRC3的表达量与炎症因子的表达量呈负相关关系,在感染前期被抑制而在感染后第3天上调。同时检测了P.multocida刺激兔肾细胞后rNLRC3的表达量,结果显示在感染10 h内rNLRC3表达量下调,随后逐渐恢复,与体内试验结果一致,因此我们推测rNLRC3可能具有负反馈调控P.multocida诱导的炎症反应的功能。2.rNLRC3调控多杀性巴氏杆菌增殖的作用为了进一步探究rNLRC3在P.multocida感染过程中发挥的作用,本研究首次克隆了rNLRC3基因并构建其全长及其各结构域（N-terminal、LRR和NACHT-LRR）真核表达载体。通过激光共聚焦显微镜观察确定rNLRC3定位于细胞浆中并且不与线粒体共定位。Western Blot检测过表达及敲低rNLRC3对P.multocida诱导的P65磷酸化入核的影响,结果显示过表达rNLRC3后,P65磷酸化水平显著降低（P＜0.05）,且入核减少,而敲低rNLRC3后,P65磷酸化水平升高;通过qRT-PCR检测过表达rNLRC3后,P.multocida诱导的IL-1β、IL-6的表达量显著减少,而敲低rNLRC3后IL-8的表达量显著增多（P＜0.05）。通过构建的qRT-PCR检测方法检测rNLRC3对P.multocida增殖的影响,结果显示过表达rNLRC3后,细菌增殖显著增加（P＜0.05）,而敲低rNLRC3后,细菌增殖显著减少（P＜0.05）。表明rNLRC3通过负反馈调控NF-κB通路进而促进P.multocida增殖,相反敲低rNLRC3后促进NF-κB通路的激活从而抑制细菌的增殖。最后确定了 rNLRC3的功能结构域,结果表明NACHT-LRR结构域抑制P65磷酸化,进而抑制炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的表达,是rNLRC3的主要功能结构域。