天然L-瓜氨酸的分析及制备研究

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瓜氨酸是一种具有多种药物及保健功能的非蛋白质氨基酸,首先发现于西瓜汁中,后来从很多葫芦科果实里面也分离出了瓜氨酸,中药植物瓜篓的根茎中也发现有大量的游离瓜氨酸。近年来国外的众多研究表明,瓜氨酸具有很多重要的生理功能,如清除自由基、异体排斥效应指示剂、血管舒张作用、稳定血压以及诊断类风湿关节炎、抗氧化等,受到了营养学和医学界的重视。本文采用高效液相色谱法分析了多种植物中的瓜氨酸含量,重点测定了西瓜及中药天花粉中的游离瓜氨酸含量,并建立了相应的瓜氨酸的提取制备方法。本文通过对植物中天然L-瓜氨酸的分析及制备研究,试图找到一条对西瓜及中药天花粉进行综合利用,从而获得一条成本低廉,生产方便,产品质量高的天然L-瓜氨酸生产路线,为中药的综合利用和农产品的深加工及废弃物利用提供一个新的途径。本文首先确定了用优化的2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生化法测定不同植物中的游离L-瓜氨酸含量,对其中含量比较高的西瓜和天花粉进行了比较综合的含量分析。西瓜的分析结果表明不同品种西瓜不同组织部位的瓜氨酸质量分数存在比较明显的差异。西瓜瓤中L-瓜氨酸的质量分数为2.5473-5.7219mg/g,西瓜皮中为1.7615-5.3470mg/g,西瓜叶中为1.4748-5.6922mg/g,西瓜茎中为3.3350-8.4652mg/g。其中红色瓜瓤品种中瓜氨酸质量分数普遍高于黄色瓜瓤品种。天花粉饮片的分析结果表明除安徽产地外不同产地的天花粉饮片中的游离L-瓜氨酸含量差别不是特别明显,最高游离L-瓜氨酸含量的天花粉饮片的产地为山东,其含量为17.646mg/g。以天花粉为原料,瓜氨酸的提取通过探讨料液比、提取次数等因素对瓜氨酸提取效果的影响,确定了最适的提取条件为:溶剂为去离子水,提取时间2h,提取温度为室温,料液比的比例为1:8,提取次数为一次,提取方式为搅拌浸提。通过对天花粉中游离瓜氨酸提取液分离纯化步骤的研究,确定了最适的分离纯化工艺条件:超滤采用外压式中空纤维膜组件,截留分子量为6000,材料为聚砜,膜面积为1.5m2,采用切向流过滤,超滤进料流速150mL/min,过滤压力0.05Mpa。超滤结束后调超滤液的pH值为4,在室温下,以6BV/h的上柱流速与732阳离子交换树脂交换吸附。瓜氨酸的洗脱采用直线梯度洗脱模式,洗脱剂采用氨水。洗脱流速为1BV/h,氨水浓度变化范围为0-1%。洗脱液经极性大孔树脂AB-8脱色后减压浓缩,加入乙醇析出结晶。结晶用乙醇洗涤后得瓜氨酸粗产品。瓜氨酸洗脱过程洗脱率为98%,产品纯度为60.3%,产品总收率为38%。西瓜分别以瓜茎和瓜皮和瓜瓤为原料,探讨了不同的提取路线。瓜茎和瓜皮采用的提取路线为浸提法,瓜瓤采用榨汁法。瓜茎的提取工艺条件为:料液比为1:4,提取时间为1h,提取方式为搅拌浸提,提取温度为室温。瓜皮的提取工艺条件为:料液比1:8,提取时间2h,提取方式为搅拌浸提,提取温度为室温。瓜瓤的提取工艺条件为:榨汁机榨汁,西瓜汁4000rpm离心去不溶物,上清液过滤。提取后的瓜氨酸精制过程采用离子交换树脂梯度洗脱。西瓜为原料提取瓜氨酸粗提过程所得滤液全部4000rpm离心去沉淀,取上清液,通过超滤处理得上柱液。瓜茎和瓜皮提取液的超滤条件为:采用外压式中空纤维膜组件,膜面积为1.5m2,超滤进料流速150mL/min,过滤压力0.05Mpa。瓜瓤汁的超滤条件为:膜面积为1.5m2,进料流速150mL/min,过滤压力0.01Mpa。离子交换精制过程的工艺条件为:上柱流速6BV/h,上柱液pH=4.0,洗脱模式为直线梯度洗脱,洗脱剂为氨水,洗脱剂浓度变化范围为0-1%,洗脱流速为1BV/h。洗脱液减压浓缩,加入乙醇低温析出结晶,得瓜氨酸粗品。瓜氨酸产品纯度为65%,总收率36%。
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