论文部分内容阅读
由于呼吸道合胞病毒毛细支气管炎(RSV毛支)临床表现酷似哮喘，部分患儿可出现反复喘息，甚至发展为哮喘，而后者的发病被认为与CD4~+辅助性T淋巴细胞(Th)功能紊乱、Th2优势免疫应答密切相关，因而有人推测RSV毛支和哮喘可能存在共同的免疫机制，RSV毛支的发生与Th2优势免疫应答及局部强烈的Ⅱ型细胞因子反应有关。福尔马林灭活的RSV疫苗(FI-RSV)加重RSV感染的实验模型为RSV毛支的Th2优势免疫假设提供了强烈的证据。但RSV感染或刺激过程中Th1或Th2细胞的优先分化成熟受多种因素的影响，活的RSV实验感染无一例外均引起Th1优势免疫应答。 既往对人类RSV感染细胞因子反应类型的研究大多通过测定其血清或单个核细胞培养上清液细胞因子或其mRNA表达水平进行分析，方法各异，结论不一。对单个淋巴细胞、尤其是Th细胞的功能状态研究甚少，亦产生了不同的结果。为此，我们应用流式细胞仪结合胞浆内细胞因子染色技术进行了外周血CD3~+、CD8~+ T淋巴细胞内白细胞介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)表达情况的检测研究，同时测定其血清IL-4、IFN-γ、IL-12水平，旨在从单个淋巴细胞水平和体液综合水平探讨机体细胞因子反应类型与婴幼儿RSV感染的关系。此外，我们还对IL-12亚单位之一-IL-12p40基因3’非翻译区(UTR)TaqI内切酶位点限制性片段长度多态性(RFLP)和IL-12p40基因启动子长度多态性与婴幼儿RSV感染的关系进行了研究探讨。 第一部分 细胞因子反应类型与婴幼儿RSV感染的关系 目的： 浙江大学博士学位论文（2003） 从单个淋巳细胞水平和体液综合水平探讨机体细胞因子反应类型与婴幼儿RSV感染临床表型之间的关系。 方法： 对44例RSV下呼吸道感染（毛支26例，肺炎18例，其中重症15例）和41例非RSV肺炎及30名对照组婴幼儿进行了研究。 1．应用直接兔疫荧光法检测呼吸道感染患儿呼吸道脱落上皮细胞中的RSV抗原； 2．应用四色流式细胞仪结合细胞浆内细胞因子染色技术对外周血CD3“、CDS丫淋巴细胞内几－4和IFN－Y表达阳性率进行检测；以C03℃08－间接定义CD矿细胞； 3．应用固相夹心酶联兔疫吸附试验方法测定血清几4、IFN－Y和IL、 水平。 结果： 1．RSV感染组m3”、CD3”CDS一、CD3”CDS”T淋巴细胞百分率与非RSV感染组及对照组比较无差异，RSV毛支与RSV肺炎或轻度RSV感染与重度RSV感染组间亦无统计差异。 2．RSV感染组血CD3＋ CDS－细胞IL－4、IFN－Y表达阳性率与非RSV感染组和对照组比较无统计差异，但RSV感染组和非RSV感染组CD3“CDS”细胞f：N－Y表达阳性率（中位数M＝2．70％和3．59％）均明显高于对照组（M＝0．81％）。 3．RSV感染组血清 IL－12水平（M＝64．62Pg／gi）与对照组（M＝48．23Pg／ml）比较无统计差异，而非 RSV感染组（M＝152．00pg／ml）则显著增高；与对照组血清！L－4水平（M＝1．37pg／ml）比较，RSV感染组（M＝1．07pg／ml）和非RSV感染组（M＝0．89pg／ml）均明显降低，但前者伴血清；FN－Y浓度的显著增高（M二40．23pg／SI VS 19．19pg／。l）及儿－4／IFN－Y比值的明显降低（M＝0．03 m 0．08）。 4．RSV毛支和RSV肺炎组及对照组婴幼）LCD3”CDS－和＊3‘CDS”细胞内几－4、IFN－Y表达阳性率比较无统计差异。 5．RSV毛支患儿血清 IL习 水平与 RSV肺炎组及对照组比较无统计差异；与对照组比较，RSV肺炎组血清几－4明显降低（M＝0．88pg／ml。1．37pg／ml），RSV毛支组m4．09PP汕．37mm加）则降低不明显，后者伴有血清K－v水平的明显 3 浙江大学博士学位论文（2003）增高（M＝47．27pg／ml 19．19pg／ml）和儿－4／IFN－m比值的降低（M二0．03 VSO．08）。 6．轻度和重度RSV感染组CD3”CDS－细胞内 IL－4和 IFN－Y表达阳性率比较无统计差异，但轻度％V感染组m3“CDS”细胞内NN－Y表达阳性率（M＝4．00％）显著高于重度隅V感染组和对照组（M＝1．15赃D 0．81％）。 7．轻度 RSV感染患儿血清 IL12水平（M二83．29pg／ml。48．23pg／ml）和 fN．Y水平（M＝39．58Pg／ml。s 19．19Pg／gi）明显高于对照组，而重度 RSV感染组＊分别为 32．06Pg／ml和 30．23Pg／ml）与对照组比较无统计差异。 结论： 1．RSV感染急性期无＊ 优势应答反应，CD3’CDS”fN－Y表达阳性率显著增高；血清 IL－4水平明显降低，IFN．Y水平则显著升高，毛支患儿尤为明显，IL－4／117M．Y比值明显降低；呈I型优势细胞因子反应； 2．轻度RSV感染患儿血清IFN．Y和IL－12水平及CD3”CDS”细胞内IFN－Y表达阳性率明显升高，重症患儿则升高不明显，提示fN．Y和 IL、 具有一定的保护作用。 第h部分ILl2P40基因多态性与婴幼儿RSV感染的关系 目的： 探讨 IL－12P40基因 3’UTR Inql内切酶位点 RFLP和 IL－12 P40启动子长度多态性与婴