苎麻不定芽器官发生转录组学研究及相关基因鉴定

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不定芽器官发生是组织培养获得再生植株的重要途径之一,目前在植物生物技术和基础研究中得到广泛应用。拟南芥中已初步建立起不定芽器官发生基因调控网络,而苎麻(Boehmeria nivea L.)中尚无相关报道。前人研究及预实验发现“华苎5号”和“大竹黄白麻”不定芽器官发生频率差异明显,因此本研究以不定芽器官发生频率较高的“华苎5号”为材料,取其不同发育时期RNA样品进行转录组学研究。选取生长素相关基因和细胞分裂素相关基因,以不定芽器官发生频率较低的“大竹黄白麻”与“华苎5号”为材料进行了实时定量PCR验证。大量文献表明生长素信号通路相关基因在不定芽器官发生中起重要作用,而该类基因在苎麻中少有报道,因此本研究还根据转录组测序信息检索、鉴定生长素信号通路相关基因,并对所获得基因进行遗传进化分析和时空表达分析。主要研究结果如下:1.苎麻不定芽器官发生转录组学研究本研究对混合样品测序构建参考数据库并对10个样品单独测序进行数字基因表达谱分析。转录组数据库共获得约10G数据,数字基因表达谱数据库获得数据约为1.3-1.9G。无参转录组拼接共获得43222条基因,其中5760条基因在苎麻不定芽器官发生过程中差异表达。根据KEGG数据库注释结果,选取16条生长素相关基因和11条细胞分裂素相关基因,分别在不定芽器官发生能力差异显著的两个苎麻品种“华苎5号”和“大竹黄白麻”中进行了实时定量PCR验证,结果表明:37条基因中仅8条基因在不同品种中表达模式相关性高于0.8,即不同苎麻品种中存在差异调控模式。2.苎麻生长素信号通路相关基因鉴定本研究选取拟南芥和桑树相关基因作为检索序列,对已发表的苎麻转录组数据库进行检索并将所得序列进行编码序列分析。最终共获得16条Aux/IAA基因、14条ARF基因、16条LBD基因、71条SAUR基因、4条AUX/LAX基因和6条PIN基因。遗传进化分析表明苎麻中存物种特异性的SAUR基因家族扩张。时空表达分析表明上述基因均在苎麻组织中存在表达,其中6条ARF、12条SAUR、1条AUX/LAX、4条PIN和全部Aux/IAA、LBD基因对生长素处理存在响应。此外,PEG模拟干旱或高温胁迫后,12条Aux/IAA、10条ARF、16条LBD和14条SAUR基因至少在一种胁迫下差异表达,这些基因可认定为干旱或高温胁迫响应基因。
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