太平洋磷虾磷脂提取及磷脂酰胆碱的分离纯化研究

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海洋生物是磷脂的优质来源,且含有大量的多不饱和脂肪酸(PUFA),尤其是EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)等n-3系列多不饱和脂肪酸(n-3PUFA,也称ω-3系列多不饱和脂肪酸、ω-3 PUFA),这使得在海洋生物机体内形成了含有独特脂肪酸成分的磷脂,即DHA/EPA磷脂。DHA/EPA磷脂(尤其DHA/EPA-PC)除具有磷脂及不饱和脂肪酸(DHA、EPA)勺双重生理功能外,还因其结构为特殊脂肪酸与磷脂分子骨架的结合,而具有诸多独特生理功能,例如:保护视力、提高学习能力、防治心血管疾病、抗癌、增加细胞膜流动性等。因此,DHA/EPA磷脂在医药保健方面具有极大的开发利用价值。但目前市面上磷脂主要分为大豆磷脂和卵黄磷脂两种。而对富含DHA、EPA的海洋源磷脂的研究相对较少,尤其是对海洋源磷脂酰胆碱的研究鲜见报道。本研究以山东半岛海域优势虾种太平洋磷虾为原料,以建立适宜工业生产的低成本、高效、绿色太平洋磷虾磷脂和太平洋磷虾PC的提取及分离纯化工艺为目标,首先开展太平洋磷虾磷脂的提取纯化工艺研究,然后以得到的太平洋磷虾磷脂为原料,进行太平洋磷虾PC的分离纯化工艺研究并进行工艺优化。具体研究内容及结果如下:首先,以太平洋磷虾粉为原料,以产物太平洋磷虾磷脂纯度及回收率为指标,对各项影响因素进行单因素试验及正交试验,优化乙醇提取太平洋磷虾粗磷脂的工艺条件。最终确定最佳实验条件为:先乙醇提取后有机溶剂脱中性脂为实验工艺流程,提取溶剂为95%乙醇、液固比5:1、提取温度40℃、提取时间3h、摇床辅助混合、提取次数2次。在最优提取条件下,所制粗磷脂产品中太平洋磷虾磷脂回收率为90.13%,纯度为28.65%。其次,以最优条件下制得的太平洋磷虾粗磷脂为原料,以产物太平洋磷虾磷脂纯度及回收率为指标,对脱中性脂工艺中各因素进行了优化,最优脱中性脂工艺条件为:以丙酮为脱中性脂试剂,液固比10:1,超声时间25min,超声功率250w,超声温度40℃,脱中性脂次数2次。最优条件下所得产品中太平洋磷虾磷脂回收率为89.26%,纯度由28.65%提高至52.93%。采用薄层层析扫描法,分析太平洋磷虾磷脂主要组分及其含量,其中太平洋磷虾PC含量为49.68%,另有5.32%PE及较多SM、 LPC。以太平洋磷虾磷脂作为原料,用柱层析法对其进行进一步分离纯化。第三,以自制太平洋磷虾磷脂为原料,以产物太平洋磷虾PC纯度及回收率为指标,优化柱层析实验条件。最终选择溶剂用量小,谱带重叠度低的中性氧化铝作为分离纯化太平洋磷虾PC柱层析实验的固定相,最优柱层析条件为:层析柱径高为D25×300mm,固定相为100~200目中性氧化铝,流动相为95%乙醇,上载量为0.3g/g氧化铝,洗脱速度为3mL/min。在此条件下纯化产物太平洋磷虾PC回收率达到65.33%,纯度达到94.29%。最后,对太平洋磷虾PC进行主要理化指标及脂肪酸组分进行测定,太平洋磷虾PC中含有丰富的不饱和脂肪酸,其中DHA+EPA含量达到总脂肪酸的30%以上。对太平洋磷虾PC在贮存过程中不同温度、光照、空气接触情况对其氧化稳定性的影响进行探讨。研究结果显示,低温、避光、隔绝空气有助于提升太平洋磷虾PC在贮藏过程中的氧化稳定性,其中低温及隔绝空气效果较避光更为显著。
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