目的：研究Apigenin对人乳腺癌恶性生物学行为的影响，并对其作用机制进行初步探讨，为临床应用Apigenin治疗乳腺癌提供实验依据。方法：体外培养人乳腺癌细胞株ZR-75-30，以Apigenin进行干预，MTT和FCM法检测细胞生长、增殖情况及细胞周期变化；观察Apigenin对细胞穿透人工基底膜Matrigel能力及诱导内皮细胞生成血管能力的影响； RT-PCR法检测MMP-9 mRNA及Ki67 mRNA的转录；免疫细胞化学染色检测细胞bcl-2及MMP-9蛋白表达；TUNEL法检测Apigenin对细胞凋亡的影响。以ZR-75-30细胞移植Balb/C(n/n)裸鼠，建立移植瘤动物模型，将54只荷瘤裸鼠随机分为3组：A组(Apigenin干预组)、B组(TAM干预组)和C组(空白对照组)。观察不同干预因素对移植瘤体积、重量等的影响；HE染色观察肿瘤组织病理学变化；透射电镜观察移植瘤组织细<WP=9>胞超微结构改变；TUNEL法检测经药物干预1周后，肿瘤组织中细胞凋亡情况；免疫组织化学染色检测bcl-2、MMP-9、CD34、VEGF、BRCA1蛋白表达；Western blot检测bcl-2、Ki 67蛋白表达。结果：体外细胞实验：MTT检测结果显示，乳腺癌细胞株5、10、20、40、60、80μmol/L Apigenin干预后，乳腺癌细胞株生长抑制率分别为8.55%, 32.57%, 44.74%, 67.43%, 73.36%及92.11%；FCM检测发现，随着药物浓度增加， G2/M期细胞分布比例呈增加趋势；在Apigenin作用下，人乳腺癌细胞株穿透人工基底膜及诱导血管内皮细胞生成血管的能力显著减弱(p<0.05)，其效应均与Apigenin浓度存在明显的量效关系；RT-PCR检测结果显示，人乳腺癌细胞株存在MMP-9 mRNA及ki67mRNA的转录，而Apigenin干预后，其转录水平均明显下调(p<0.05)；免疫细胞化学染色显示，未经药物干预的细胞，其bcl-2及MMP-9蛋白呈强阳性表达；Apigenin干预后，其表达水平被明显下调；TUNEL检测显示，干预前肿瘤细胞株未见凋亡现象，干预后42.3%的细胞其胞核染成棕黄色，呈现凋亡征象。 <WP=10>动物体内实验一般情况观察：人乳腺癌细胞株ZR-75-30接种裸鼠后，52只动物于接种后10天左右，局部出现肿块，成瘤率96%。随接种时间延长，瘤体体积逐渐增加，肿瘤呈结节或分叶状，部分瘤体表面皮肤出现破溃；肿瘤瘤体表面可见丰富血管网包绕。在光镜下，A组移植瘤组织出现不同程度的变性坏死，大部分肿瘤细胞出现肿胀，核固缩、核碎裂或核溶解，肿瘤组织间质内血管数量减少，部分血管内可见明显血栓形成，远离血管处可见大片坏死细胞；B组可见肿瘤细胞呈肿胀变性等改变；C组移植瘤细胞仍保持体外细胞株培养时的基本特征：核异形性明显，可见异常的核分裂相；肿瘤细胞排列紊乱，极性消失，成团块或条索状排列；癌组织中可见结缔组织和毛细血管增生，血管增生以肿瘤边缘最为显著，肿瘤中心可见少许坏死区域。透射电镜观察A组肿瘤组织中可见凋亡细胞，表现为核固缩、碎裂，胞浆电子密度增高，凋亡小体形成；同时可见细胞大量肿胀坏死，表现为细胞核肿胀溶解，电子密度降低，异染色质凝集，线粒体肿胀，胞浆空泡化，有较多脂滴沉积，胞膜完整性破坏；B组可见较多凋亡细胞，表现为核异染色质浓缩，凋亡小体形成，另可见线粒体轻到中度肿胀，核较大，核仁肥大边集，细胞器减少；C组乳腺癌细胞围成腺腔样结构，胞核大、畸形，偶见凋亡细胞。 <WP=11>TUNEL染色发现，经Apigenin作用组，肿瘤组织出现大量凋亡细胞；TAM作用组中，同样有凋亡细胞，但其比例低于Apigenin治疗组，在空白对照组，仅见极少凋亡细胞。免疫组织化学染色检测相关蛋白表达：经Apigenin和TAM作用后，肿瘤组织细胞中bcl-2、MMP-9、CD34、VEGF表达明显减弱，而BRCA1表达增强。在空白对照组， bcl-2、MMP-9、CD34、VEGF蛋白均为强阳性表达，而BRCA1表达下调。westernblot法检测Bcl-2及ki 67蛋白表达，结果显示，经Apigenin作用后，Bcl-2及ki 67蛋白表达水平下降，随干预时间延长，其表达呈下降趋势。TAM组，肝、肺可见一定程度的损害，表现为肝细胞肿胀，肝细胞索增粗，肝血窦受压缩窄；肺间质轻度水肿；而Apigenin组未见上述改变。 结论：体外细胞实验证实，Apigenin可显著抑制人乳腺癌细胞ZR-75-30的增殖，使细胞阻滞于G2/M期，抑制作用呈明显的量效关系；Apigenin可降低ZR-75-30细胞侵袭能力并抑制ZR-75-30细胞诱导血管内皮细胞的血管生成作用；Apigenin可下调MMP-9、ki67基因mRNA转录水平，并降低bcl-2及MMP-9蛋白表达，Apigenin还可显著地促进肿瘤细胞的凋亡。体内实验证实，Apigenin可显著抑制移植瘤生长，光镜及电镜均<WP=12>观察到肿瘤细胞凋亡或变形坏死等改变，凋亡进一步由TUNEL染色证实；免疫组织化学染色见bcl-2、MMP-9、CD34、VEGF表达明显减弱，而BRCA1蛋白表达则增强，与体外实验结果基本一致。Western blot检测Bcl-2及ki67蛋白表达下调。体内外实验均表明，Apigenin可从多个方面发挥抑制人乳腺癌细胞株ZR-75-30及其裸鼠体内移植瘤的恶性生物学行为，从增殖、侵袭能力、血管生成以及促使细胞凋亡等多方面发挥抗乳腺癌作用，并显示了较TAM更为显著的效果和更低的毒副反应，为临床应用