论文部分内容阅读
[背景及目的]肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因,非小细胞肺癌(non-small-cell Lung cancer,NSCLC)约占所有病例的80%,是肺癌的主要亚型。由于肺癌易复发和转移,目前放化疗和分子靶向治疗是临床上针对晚期非小细胞肺癌主要治疗方案。其中分子靶向治疗具有毒副反应小、疗效好等优点,在临床治疗中显著提高了患者的生活质量。尽管靶向药物对治疗肿瘤有着突出的优点,但分子靶向治疗只适用于特定基因突变患者,而且容易产生耐药,而对于未发现基因突变的人群,治疗上仍然是个空白区。因此探索新的药物靶点已成为目前肺癌治疗的研究热点。我们课题前期通过对非小细胞肺癌组织样本进行免疫组织化学分析发现,相比癌旁组织,G蛋白偶联受体激酶5(GRK5)在肺癌组织中高表达;与免疫组化结果一致的是,利用qRT-PCR 比较肺癌及癌旁组织GRK5的转录表达水平,以及比较正常肺上皮细胞系BEAS-2B等发现,GRK5在肺癌组织及细胞系中确实高表达;由此推测,GRK5在非小细胞肺癌中起着重要的作用。GRK5已被证明在包括癌症在内的多种病理条件的发展和进展中发挥关键作用。本研究通过检测GRK5在非小细胞肺癌细胞中的表达情况,探讨其生物学意义及相关性;同时,我们将非小细胞肺癌细胞株H1299及SPC-A1作为实验对象,通过在这两株细胞中抑制表达GRK5,观察GRK5对非小细胞肺癌H1299及SPC-A1细胞增殖、迁移、侵袭等生物学影响;探讨其分子表达的机制,以期未来将GRK5作为NSCLC诊断、治疗及预后的新靶点。[方法]1、构建抑制GRK5表达的siRNA(小干扰RNA),并用脂质体法转染H1299及SPC-A1细胞,同时设NC作为阴性对照组。2、通过荧光及qRT-PCR筛选稳定细胞转染株;用Western Blot检测抑制GRK5表达后对H1299、SPC-A1细胞中GRK5蛋白表达的影响。3、用CCK8法检测抑制GRK5表达对H1299、SPC-A1细胞增殖能力的影响。4、用Transwell小室检测抑制GRK5表达对H1299、SPC-A1细胞迁移及侵袭能力的影响。5、用细胞划痕的方法检测抑制GRK5表达对非小细胞肺癌细胞H1299、SPC-A1迁移能力的影响。[结果]1、qRT-PCR检测表明GRK5 siRNA能明显抑制H1299、SPC-A1肺癌细胞株中GRK5表达水平(p<0.05)。2、Western Blot结果表明经GRK5 siRNA转染后,GRK5蛋白表达均降低(p<0.05)。3、CCK8检测表明GRK5 siRNA转染H1299、SPC-A1肺癌细胞后细胞增殖受到显著抑制(p<0.05)。4、细胞划痕实验表明经GRK5 siRNA转染H1299、SPC-A1肺癌细胞后迁移速度明显减慢(p<0.05)。5、细胞迁移、侵袭实验表明经GRK5 siRNA转染H1299、SPC-A1肺癌细胞后迁移速度明显减慢(p<0.05)。[结论]1、GRK5在非小细胞肺癌细胞中高表达。2、抑制GRK5表达可明显抑制肺癌细胞株H1299、SPC-A1的增殖,减低其迁移速度,减弱侵袭能力,进而促进肺癌细胞H1299、SPC-A1的凋亡。3、本实验中探讨了 GRK5与非小细胞肺癌细胞生物学功能的相关性,为非小细胞肺癌治疗的新靶点提供思路。