龙葵多糖糖蛋白诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

来源 :哈尔滨商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangxiaoxiao880523
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本实验通过体外实验方法探讨龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用。首先,通过MTT法检测龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒作用。其次,从形态学观察龙葵多糖糖蛋白对细胞的影响,包括:光镜观察龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞形态的改变;Hoechst33258染色荧光显微镜观察龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞形态的改变;Annexin V-FITC/PI双染激光共聚焦扫描仪显微镜观察龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞形态的改变;然后,通过PI染色流式细胞术检测龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用。最后,采用Fluo-3/AM标记激光共聚焦扫描显微镜检测龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞Ca2+浓度的影响;比色法检测龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞Caspase-3活性的影响来研究龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡机制的影响。实验结果表明,(1)MTT法显示龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞具有细胞毒作用,其IC50值为603.79μg/mL。(2)吉姆萨染色结果显示,阴性对照组MCF-7细胞排列紧密,细胞呈菱形;随龙葵多糖糖蛋白作用剂量的增高,细胞间连接变松散、密度稀疏、周围碎片增多、体积变小、部分细胞发生皱缩变形等现象,颗粒样物质增多,并有染色致密的凋亡小体形成;Hoechst33258荧光染色结果显示,阴性对照组中MCF-7细胞染色质均匀,核形态规则,给药组细胞呈现致密浓染荧光,细胞形态呈现出细胞凋亡现象;Annexin V-FITC/PI双染激光共聚焦扫描仪显微镜观察龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞形态观察结果显示,正常活细胞AnnexinV和PI均低染,凋亡细胞细胞膜呈绿色荧光,细胞核呈红色荧光,表明龙葵多糖糖蛋白可诱导MCF-7细胞凋亡。(3)PI染色流式细胞仪检测龙葵多糖糖蛋白对MCF-7细胞凋亡的作用:龙葵多糖糖蛋白作用于MCF-7细胞48h后,肿瘤细胞有明显的凋亡峰出现,细胞凋亡随着药物剂量增加而增加,凋亡率由(27.5±2.1)%上升至(53.8±1.9)%,说明龙葵多糖糖蛋白对MCF-7的抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。(4)Fluo-3/AM标记激光共聚焦扫描显微镜检测龙葵多糖糖蛋白对MCF-7细胞Ca2+浓度的影响的实验结果表明,并且随着龙葵多糖糖蛋白剂量的增加,细胞内钙离子浓度增幅也相应地增大,且与对照组相比都具有统计学意义;比色法研究表明,随着龙葵多糖糖蛋白剂量的增加,细胞内Caspase-3活性逐渐增多,且与对照组差异显著。以上实验研究表明,龙葵多糖糖蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞具有一定的细胞毒作用,可以通过影响人乳腺癌MCF-7细胞内第二信使Ca2+的浓度并最终激活Caspase-3酶活性进而诱导MCF-7细胞凋亡。
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