草地早熟禾(Poa pratensis L.)抗旱耐盐基因遗传转化

来源 :北京林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zx385213
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究通过对草地早熟禾(Poa pratensis L.)植株再生体系的优化,建立了适合于三个品种的高频再生体系。在此基础上,通过基因枪轰击法把与抗旱、耐盐有关的外源基因(DREB1A、BADH-CMO、CMO)对草地早熟禾胚性愈伤组织进行遗传转化,经过潮霉素筛选、PCR扩增与Southern杂交检测,获得了转基因植株。同时,对部分转基因植株进行了干旱、盐碱胁迫处理,检测了转基因植株在抗旱、耐盐特性上的实际效果。通过研究,获得了以下结果:1.通过对不同外植体诱导效果,接种方式,培养条件等因素的研究,确定了以下的愈伤组织诱导条件:以成熟种子为外植体,消毒处理后,直接接种于愈伤组织诱导培养基中黑暗培养。培养基的碳源是30mg/L蔗糖。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤组织继代能够保持草地早熟禾的胚性,可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。2.通过单因素与正交试验设计,获得了适合于‘Baron’(简称B)、‘Mardona’(简称M)、‘Midnight’(简称Md)品种的完整高频再生体系。P2:MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1mg/L)+ CuSO4(3mg/L)+CH(1g/L)为B品种的愈伤组织诱导培养基,P5:MS+2,4-D(2mg/L)+6-BA(0mg/L)+CuSO4(3mg/L)+CH(1g/L)为Md品种的愈伤组织诱导培养基,KM:MS+2,4-D(2mg/L)+6-BA(0.2mg/L)+ CuSO4(3mg/L)+CH(1g/L)为M品种的愈伤组织诱导培养基,三个品种最高胚性愈伤组织诱导率分别为38.19%、28.66%和31.67%;AK2:MS+KT(0.2mg/L)+6-BA(1mg/L)为B品种愈伤组织分化培养基,AL2:MS+6-BA(1mg/L)+LH(0.5g/L)为Md品种愈伤组织分化培养基,KBN:MS+KT(0.2mg/L)+ 6-BA(1mg/L)+NAA(0.5mg/L)为M品种愈伤组织分化培养基,三个品种最高愈伤组织分化率分别为53.33%、53.67%和60.00%。3.在已经建立的高效再生系统基础上,通过研究不同的基因枪轰击参数,得到适合于草地早熟禾基因枪轰击的条件:采用Ca(NO3)2+PEG4000包被质粒DNA;使用1μm金粉作为质粒DNA的载体;轰击高度为6cm、轰击次数为1次、无渗透处理进行轰击效果较好。采用潮霉素(Hy)为草地早熟禾转基因植株抗生素筛选标记,Md品种愈伤组织继代的筛选浓度为130mg/L,B品种愈伤组织继代的筛选浓度为100mg/L。4.通过采用基因枪转化法将DREB1A、BADH-CMO、CMO基因导入草地早熟禾胚性愈伤组织中,并且获得了再生植株。通过PCR、Southern分子检测,证明在B品种中获得转DREB1A基因株系13个,转双基因株系23个,转CMO基因株系6个。在Md品种中获得了转DREB1A基因株系1个,转双基因株系1个。在M品种中获得了转双基因株系2个,转CMO基因株系2个。5.通过对部分转基因植株进行干旱、盐碱胁迫处理,对质膜透性、MDA含量、SOD
其他文献
目的:探讨颈动脉血管彩色多普勒超声检查对早期心脑血管病的临床效果。方法:选取我院2017年12月-2018年12月收治的64例早期心脑血管病患者,另取64例同期来我院体检的健康人群
20世纪30年代,中国遭遇的经济危机给当时的家庭造成了沉重的打击,吴组缃的破产小说对其进行了客观的描写。他通过对皖南农村家庭的书写反映了当时的社会经济现状和家庭形态的
国际贸易融资业务具有风险低,投资少,并且回报高的优势,它既是资金的融通方式,也是银行信用的一种行为。在国际贸易融资过程中,为了提高融资业务的安全性,相关工作人员要有规
【正】在当前的社会形势之下,能否顺利实现就业成为制约军转干部选择自主择业的主要因素之一;而如何推动自主择业军转干部就业,也成为自主择业军转干部管理服务部门亟需探索
环境胁迫是影响植物高产优质的一个重要因子,解析温度、光照和养分等逆境对蔬菜系统发育的影响不仅具有重要学术价值,而且对蔬菜生产具有一定的指导意义。我国园艺设施相对简
"三农"问题是全党工作的重中之重.小城镇建设作为解决"三农"问题的战略举措,其主要目标是实现农村人口的城镇化,使农村人口融入城镇,成为城镇居民.但我国的小城镇建设在实现
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
目的:分析缺血性脑血管疾病患者中颈部血管超声的临床价值。方法:将2017年1月至2018年12月在本院接受诊治的71例缺血性脑血管疾病患者纳入疾病组,将同期在本院实施健康体检的
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
文章通过对上海市儿童阅读状况的调查与分析,研究在线阅读对都市儿童阅读习惯的影响。文章从阅读方式、阅读时间、内容选择、媒介偏好、阅读辅导等5个方面入手,通过各项数据