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猪繁殖应呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍、流产、木乃伊及仔猪呼吸系统疾病为主要特征的疾病。PRRSV是一种不分节段的单股正链RNA病毒,由于病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA Polymerase)缺少校对功能,使基因在复制过程中容易出现缺失、插入和突变的现象,继而造成PRRSV具有高度的变异性和毒株多样性。本研究运用分子检测与鉴别技术,对河南及周边地区的PRRSV流行情况进行调查,并通过遗传进化和重组性分析,旨在为PRRS的临床诊断和有效防控提供参考依据。1.对2017-2018年河南及周边地区的PRRSV进行分子流行病学调查,并将NSP2序列进行遗传进化分析本试验对241份临床样品进行RT-PCR检测,其中PRRSV阳性共121份。121份阳性中有 92 份类NADC30 PRRSV、24 份 HP-PRRSV、3 份经典型PRRSV、1 份欧洲型 PRRSV,及1份HP-PRRSV与类NADC30混合感染。选择具有代表性的临床样品进行NSP2序列测定,最终获得23个NSP2序列。对23个NSP2序列进行遗传进化分析,结果显示,有10个毒株在NSP2 区域存在131个氨基酸的不连续缺失,与NADC30毒株序列一致性较高;有10个毒株在NSP2区域存在30个氨基酸的不连续缺失,与JXA1毒株序列一致性较高;有2个毒株NSP2序列与CH-1a毒株一致较高;另有1个毒株NSP2序列与Lelystad virus毒株一致性较高,且在NSP2区域连续有54个氨基酸的缺失。PRRSV毒株的NSP2基因变异程度较大,同时在猪群中各种基因型共同存在,加深了PRRSV在田间流行的复杂性。因此有必要对PRRSV的流行和变异进行持续监测,为PRRSV的临床诊断和有效防控提供参考依据。2.PRRSV类NADC30毒株全基因序列测定和重组分析为进一步了解河南地区类NADC30毒株的遗传变异情况,对检测到的部分毒株进行全基因序列测定,共获得10个类NADC30毒株的全基因序列。同源性分析结果显示:10个毒株与VR2332株的核苷酸序列同源性为84.8%-86.8%,与JXA1株的同源性为83.4%-88.5%,与美国NADC30株的同源性为90.1%-94.8%。遗传进化分析显示:10个毒株均位于以NADC30为代表的NADC30-Like亚群,且10个毒株在遗传进化树中所处分支与HNjz15及HENAN-HEB更近。重组性分析显示:10个毒株中有4个毒株未发生重组;有6株与HP-PRRSV发生重组,其中5株在非结构蛋白处发生重组,另1株在非结构蛋白和结构蛋白处均发生重组。本研究为深入分析类NADC30毒株在我国的变异与重组提供了参考。3.3株类NADC30毒株的分离与鉴定本试验将检测到的3份类NADC30临床样品研磨液接种PAM细胞进行病毒分离,对细胞培养物进行RT-PCR鉴定,成功分离到3株病毒。