[目的]雪上一枝蒿是短柄乌头的干燥块茎,剧毒,为我国西南地区常见常用的中草药;由雪上一枝蒿泡制药酒和配伍不当,误服和过量所导致的中毒案件时有发生,针对雪上一枝蒿中毒案件的法医学鉴定更多集中于相关毒物的检测,缺乏针对雪上一枝蒿中毒的法医学综合鉴定技术研究。首先,本研究通过建立雪上一枝蒿中主要七种生物碱的LC-MS/MS检测方法,对雪上一枝蒿乙醇提取液中所含的七种生物碱进行定性定量分析;其次,以雪上一枝蒿主要生物碱之一的雪上一枝蒿甲素作为目标物,研究其在SD大鼠的体内的药代动力学特征;最后,以雪上一枝蒿乙醇提取物作为目标物,通过代谢组学和病理学的方法研究其在SD大鼠的体内代谢与毒性作用的相关性,形成了关于雪上一枝蒿中毒的法医学鉴定综合技术及应用研究。[方法]1、雪上一枝蒿七种主要生物碱的LC-MS/MS检测方法:选择合适的流动相并调整仪器的色谱和质谱等相关检测参数,获得关于雪上一枝蒿甲素、乙素、庚素、乌头碱、次乌头碱、滇乌头碱、新乌头碱七种生物碱的合适检测条件;再对所建立的检测方法的专属性、标准曲线及定量下限、稳定性、精密度与准确度、加标回收率等五个方面进行方法学验证。2、雪上一枝蒿甲素的药代动力学研究:选取18只雄性SD大鼠,划分为3个组,高、中、低剂量组;其给药剂量分别为30mg/kg、20mg/kg、10mg/kg;单次灌胃给药;给药后于 5min、10min、20min、40min、1h、1.5h、2h、3h、4h、8h、12h、24h采集尾静脉血,采用LC-MS/MS法对血液中雪上一枝甲素进行检测;以DAS 2.0软件对实验数据进行分析,获得各剂量组的药代动力学参数。3、雪上一枝蒿乙醇提取物对SD大鼠的毒性损害:选取40只SD大鼠,分为4组,高、中、低3个剂量组和1个对照组;连续灌胃给药30天建立亚急性中毒模型;采用GC-MS对血,尿中的内源性代谢物进行定性定量分析,通过对内源性代谢物的组间分析,筛选出差异代谢物;并用RStudio软件筛选出毒性作用的主要的差异代谢通路,运用差异代谢物、差异代谢通路及KEGG数据库进行分析,探索主要代谢通路之间的的相互作用。四个实验组每组选取三只SD大鼠进行病理学检验,取各组大鼠的主要脏器组织制作HE染色的病理切片,通过显微镜观察并分析SD大鼠组织病理变化。[结果]1、建立了同时检测雪上一枝蒿中七种主要生物碱的LC-MS/MS同步检测方法:七种生物碱包括雪上一枝蒿甲素、乌头碱、雪上一枝蒿乙素、次乌头碱、滇乌头碱、新乌头碱,雪上一枝蒿庚素;其定量下限为2ng/mL,线性范围为2-125ng/mL,线性范围内的各浓度点之间线性关系均较好;精密度均在-15%～15%之间,准确度均在-15%～15%之间。七种生物碱的加标回收率均在85%～110%之间。在室温条件下放置6-8 h、-20℃条件下保存三天、-20℃条件下保存反复冻融三次等三种条件下稳定性良好。2、雪上一枝蒿甲素的药代动力学:高、中、低剂量组的给药剂量分别为30mg/kg、20mg/kg、10mg/kg,血药浓度达峰时间分别为 0.662±0.212h、0.83±0.186h、0.94±0.434h,达峰浓度分别为 8249.197±2831.964mg/L,3098.414±2432.801mg/L、1047.744±412.528mg/L,半衰期分别为 1.06±0.419 h、0.924±0.243h、0.667±0.307h。3、雪上一枝蒿乙醇提取物对SD大鼠的毒性损害:以不同实验组与对照组的检测数据进行代谢组学分析,筛选出肌氨酸、乳酸、糖酸、葡萄糖醛酸等14种主要差异代谢物;不同剂量的实验组和对照组之间,血清样本和尿液样本均显示影响了甘氨酸、苏氨酸和丝氨酸的代谢,D-谷氨酸和D-谷氨酰胺代谢,丙酮酸代谢,组氨酸代谢四条主要代谢通路;病理学检验结果表明SD大鼠毒性改变主要以肝肾器官和心血管系统损害为主;四条主要代谢通路与相关的差异代谢物分析显示均会影响TCA循环,进而影响细胞内能量转换,与病理学观察中的心脏毒性相吻合。[结论]建立了一种同时检测雪上一枝蒿中七种主要生物碱LC-MS/MS定性定量分析方法;获得了三个剂量的雪上一枝蒿甲素在SD大鼠体内的药代动力学特征;获得了雪上一枝蒿中毒大鼠的代谢组学变化及病理学特征;基于以上研究形成了有关的雪上一枝嵩中毒的法医学综合鉴定技术研究,为疑似雪上一枝蒿中毒案件鉴定提供检测技术及理论依据。