脂肪酶催化甘三酯与磷脂酰胆碱酯交换的研究

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大豆卵磷脂(phosphatidylcholine,PC)有多种生理功能,其脂肪酸组成与大豆油相似,这在一定程度上限制了大豆卵磷脂的应用。本文以大豆卵磷脂为原料,在正己烷溶剂体系中使用脂肪酶催化甘三酯与卵磷脂发生酯交换反应,将特定脂肪酸引入到磷脂中,从而获得富含特定脂肪酸的磷脂产品,以满足不同磷脂产品的需求,扩大磷脂的应用范围。对正己烷体系下脂肪酶催化亚麻籽油与大豆卵磷脂的酯交换反应进行了研究,选用了五种催化剂(Novozym 435、Lipozyme TLIM、Lipozyme RMIM、Lipozyme CALBL、Lipozyme 100L TL)进行研究并筛选出Novozym 435为最佳催化剂。以酯交换量和PC回收率为考察指标,对影响酯交换反应的工艺条件(加酶量、温度、加水量、底物比、磷脂浓度)进行了分析研究。通过响应面实验对反应条件进行了优化,得到的优化工艺如下:加酶量15%(以PC和FSO总质量计),温度49℃,加水量5%(以PC质量计),底物比1:3(PC中脂肪酰基/FSO中脂肪酰基,mol/mol),磷脂浓度0.3 g/ml(PC/正己烷),时间21 h。在此优化工艺下,测得的酯交换量为20.5±0.1%,磷脂的回收率为52.8±0.9%。各因素对酯交换量的影响程度为:加水量>时间>加酶量>温度;对PC回收率的影响程度为:加酶量>加水量>时间>温度。对正己烷溶剂体系下脂肪酶催化油茶籽油与磷脂酰胆碱酯交换反应进行了研究,首先选用了三种催化剂(Novozym 435、Lipozyme TLIM、Lipozyme RMIM)进行研究并筛选出Novozym 435为最佳催化剂。将油酸含量不同的油脂与卵磷脂的反应,发现随着甘三酯组成中油酸含量的升高,酯交换速率逐渐加快。通过设计响应面优化实验,确定了最佳工艺条件。所得优化工艺条件为:加酶量13%(以PC和COO总质量计),温度55℃,加水量5%(以PC质量计),底物比1:3(PC中脂肪酰基/COO中脂肪酰基,mol/mol),磷脂浓度0.3 g/ml(PC/正己烷),时间8 h。在最佳条件下酯交换量可达29.6±0.1%,磷脂的回收率为66.0±1.2%。各因素对酯交换量影响大小的顺序为:加水量>时间>加酶量>温度。各因素对PC回收率影响大小的顺序为:加水量>温度>加酶量>时间。对正己烷溶剂体系下脂肪酶催化卵磷脂与棕榈硬脂酯交换反应进行了研究。首先选用了三种催化剂(Novozym 435、Lipozyme TLIM、Lipozyme RMIM)进行研究并筛选出Lipozyme RMIM为最佳催化剂。通过设计响应面优化实验,确定了最佳工艺条件。所得优化工艺条件为:加酶量25%(以PC和COO总质量计),温度47℃,加水量4%(以PC质量计),底物比1:2(PC中脂肪酰基/棕榈硬脂中脂肪酰基,mol/mol),磷脂浓度0.3 g/ml(PC/正己烷),时间28 h。在最佳条件下酯交换量可达19.8±0.1%,磷脂的回收率为50.6±1.1%。各因素对酯交换量影响大小的顺序为:加酶量>加水量>时间>温度。采用溶剂法分离产物改性卵磷脂,经丙酮萃取后,得到改性卵磷脂的纯度为53.0%,得率仅为36.3%。采用柱层析法分离产物,以硅胶为吸附剂,三氯甲烷-甲醇-水(65:35:5)为洗脱剂进行洗脱,可得到高纯度的改性卵磷脂产品(纯度>95%)。
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