石榴花多酚对ApoE-/-小鼠肝脏功能的影响及石榴花多酚中没食子酸和鞣花酸的含量测定

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目的:基于ApoE-/-小鼠建立的非酒精性脂肪肝模型,观察石榴花多酚(pomegranate flower polyphenols,PFP)对ApoE-/-小鼠肝脏功能的影响,进一步探讨石榴花多酚对血脂和肝功能的药效并为石榴花多酚作用机制的研究提供前期的实验室资料。另外,用紫外分光光度法测定石榴花多酚中总多酚含量,采用高效液相(HPLC)色谱法测定石榴花多酚中没食子酸和鞣花酸的含量,为石榴花药材的质量控制以及主要化学成分的测定提供实验室资料。方法:将20只幼龄的ApoE-/-小鼠和10只C57B6/L小鼠(空白组)随机分为空白组,模型组和PFP组,适应性喂养1周后,再予以高脂饲料喂养8周,建立非酒精性脂肪肝小鼠模型,PFP组小鼠给予石榴花多酚(140mg/kg)gua空白组和模型组给予等体积的蒸馏水灌胃,8周后测定空腹血糖,眼眶采血后处死动物并留取样本,检测血清中胰岛素水平,血脂和转氨酶水平以及肝脏病理学变化。用紫外分光光度法测定石榴花多酚中的总多酚含量,采用Waters Symmetry Shield RP18(250mm×4.6mm×5μm)色谱柱,以甲醇-0.05酸水溶液(5:95)为流动相,流速1.Oml/min,检测波长273nm,柱温25℃,进样量10μl,计算没食子酸峰面积,采用Waters Symmetry Shield RP18(250mm×4.6mm×5μm)色谱柱,以甲醇-0.3磷酸水溶液(55:45)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长254nm,柱温35℃,进样量10μl,计算没食子酸峰面积。结果:与空白组相比,模型组小鼠胰素水平(Flns)和胰岛素抵抗指数(IRI)明显增高,与模型组相比,PFP组小鼠胰岛素水平(Flns)、胰岛素抵抗指数(IRI)明显降低,与空白组相比,模型组Tc、TG水平明显升高,与模型组相比PFP组TC、TG水平明显下降,与空白组相比,模型组HDL-C水平有所下降,与模型组相比,PFP组HDL-C水平有所升高,但无统计学差异,与空白组相比,模型组LDL-C水平有所增高,与模型组相比,给药组LDL-C水平有所下降,但无统计学差异,与空白组相比,模型组小鼠ALT、AST水平明显升高,与模型组相比,给药组小鼠ALT、AST水平明显降低,与空白组相比,模型组SOD和GSH-PX活力明显下降、MDA 水平显著升高,与模型组相比,PFP组小鼠SOD和GSH-PX活力明显升高、MDA水平显著下降,与模型组相比,PFP组小鼠肝细胞内脂肪滴明显减少;石榴花多酚中总多酚含量为40.13%,没食子酸在0.005-0.12mg/ml(r=0.9999)浓度范围之内与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率100.25%,RSD=1.67%;鞣花酸在0.01-0.08mg/ml(r=0.9999)浓度范围之内与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率100.59%,RSD=0.87%。结论:动物实验结果显示石榴花多酚能够明显降低ApoE--小鼠血脂水平,降低血清转氨酶含量,缓解胰岛素抵抗,减少肝细胞内脂肪滴的形成。HPLC法所建立的色谱条件和实验方法准确,简便,能够检测石榴花中没食子酸和鞣花酸的含量;
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