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研究背景乳腺癌作为影响女性健康最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升。甲基转移酶Zeste基因增强子同源物2(Enhancer of zeste homolog2,EZH2)作为多梳抑制复合物2(Polycomb Repressive Complex 2,PRC2)其中一个核心亚基,主催化组蛋白H3赖氨酸27三甲基化(H3K27me3)。作为表观遗传修饰因子调控其他基因转录,是基因沉默的重要机制之一,进而参与并调控一系列肿瘤生物学行为。EZH2在肿瘤中的异常表达有致癌或抑癌功能,在肿瘤发生发展过程中起重要作用,且与乳腺癌患者侵袭转移及预后不良相关。EZH 2已成为治疗包括淋巴瘤和胶质瘤等在内的多种肿瘤有效治疗靶点。上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)在肿瘤的发生发展、组织再生和肿瘤侵袭转移等起着至关重要作用。GSK126,一种高选择性S-腺苷甲硫氨酸竞争性EZH 2甲基转移酶抑制剂,对EZH2基因的过表达有较强的调控作用,但在乳腺癌实体瘤上的抗肿瘤作用并非确切,本课题将对其进行研究。目的1.分析EZH2在乳腺癌中的表达情况及其表达水平是否影响患者生存预后;2.探讨EZH2制剂GSK126对MCF-7及MDA-MB-231人乳腺癌细胞的生物学作用,并初步探讨其机制,从而为乳腺癌患者临床治疗提供新策略。方法1.利用Oncomine及TCGA数据库分析EZH2在乳腺癌中的表达情况;利用KM-plotter数据库对EZH2生存期情况进行评估。2.为研究GSK126对乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231的生物学影响。(1)Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测EZH2抑制剂GSK126对细胞生长增殖情况的影响。(2)划痕损伤实验观察GSK126对其迁移能力的影响。(3)流式细胞学技术Annexin V-FITC/PI双染检测GSK126对乳腺癌细胞凋亡的影响。(4)Western blot检测GSK126对乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231处理后EZH2、H3K27me3、E-Cadherin、Vimentin蛋白表达的变化。使用SPSS22.0统计软件进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果1.EZH2在乳腺癌组织标本的表达高于正常组织,且其高表达组生存期要明显低于低表达组患者(P<0.05)。2.体外细胞实验(1)CCK-8实验,将不同浓度GSK126处理MCF-7及MDA-MB-231后,肿瘤细胞增殖能力明显下降,且呈剂量依赖性差异(P<0.05)。(2)EZH2抑制剂GSK126在10u M对MCF-7及MDA-MB-231细胞24h的迁移宽度分别为198.17±11.82,198.67±26.07,相比于各组DMSO对照168.80±15.75,167.83±25.05,差异有统计学意义(P<0.05);48h的迁移宽度分别是190.00±8.76,184.33±19.79,迁移宽度差异有统计学意义(P<0.05),说明GSK126可抑制细胞的迁移;(3)相较于MCF-7及MDA-MB-231对照组(DMSO组)细胞凋亡率7.29±1.07%和6.41±0.24%在GSK126 5u M、10u M、15u M浓度下分别为10.77±0.47%、12.43±0.50%、14.90±0.92%及9.11±0.85%、10.49±0.75%、16.07±0.63(P<0.05),GSK126可促进细胞凋亡。(4)乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞EZH2、H3K27me3及EMT标志物的蛋白表达水平变化:以GAPDH作为内参,分别在GSK126作用下,与MCF-7及MDA-MB-231 DMSO组细胞相比,EZH2的表达无差异,无统计学意义(P>0.05);H3K27me3表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);上皮标志物E-Cadherin的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);间质标志物Vimentin表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.EZH2在乳腺癌中表达增高,且高表达EZH2与低生存期相关。2.EZH2抑制剂GSK126抑制乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231的增殖及迁移,促进细胞凋亡,并有可能通过抑制组蛋白甲基化修饰抑制EMT过程。