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研究背景：进入21世纪以来,全国心血管病总死亡率从2004年的240.03/10万人升至2010年的268.92/10万人,平均每年上升5.50/10万人。脑卒中是常见的心脑血管病,目前是世界第三大死因,在所有心脑血管病死亡中,脑卒中居第二位。目前我国现存脑血管病患者,其中约70%为缺血性脑卒中。缺血性脑卒中是一组以脑组织缺血性损伤和体征为主要临床表现的急性脑血管病,具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点。据流行病学数据估计,目前中国每年新发脑卒中约200万,每年死于脑卒中的约150万,其中大部分为缺血性脑卒中。即使经临床积极抢救后幸存的患者中,也大多伴有程度不同的卒中后遗症,包括严重偏瘫、瘫痪的运动障碍,言语障碍,学习记忆下降和空间识别、认知能力减低,严重影响患者生存质量,加大经济和社会负担。因此寻求有效的缺血性脑卒中治疗方案是当前基础和临床研究共同面临的巨大挑战和难题。藏医药学是中华民族医学的瑰宝之一,两千多年来经过无数藏医药学家医疗实践经验的积累和升华,已逐渐形成了一套独特的理论体系,而藏药在临床实践中显示了它对神经系统疾病的疗效优势。藏药七十味珍珠丸是藏医临床治疗各种急慢性脑血管疾病最常用的药物,经历代藏医的不断实践以及近年来的临床观察表明,该药可治疗中风、瘫痪、半身不遂等神经系统疾病,其为治疗脑血管疾病尤其是脑梗及其后遗症方面注入新鲜血液。但临床往往联合用药治疗,七十味珍珠丸的单药疗效如何及其通过何种机制起到治疗脑卒中的作用,目前的研究鲜见相关的报道,这也是我们进行本次课题的初衷。研究目的：1、观察七十味珍珠丸对急性脑血栓大鼠模型血栓程度和脑水肿程度的影响,通过预实验筛选如下检测指标：血液流变学、血栓素A2(thromboxane A2,TXA2)、前列环素(prostacyclin, PGI2)及TXA2/PGI2,探究七十味珍珠丸抗脑血栓的作用以及可能机制。2、观察七十味珍珠丸对pMCAO大鼠脑梗面积、神经行为和血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100β蛋白的影响,并通过对药物本身微量元素的认知和大胆猜测,选出如下检测指标：过氧化氢酶(CAT)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),来探究七十味珍珠丸的神经保护作用以及可能机制。研究方法：1、七十味珍珠丸抗实验性大鼠脑血栓形成作用及可能机制研究购买250-300g SD大鼠96只,分为两批,每批随机分为6组,即空白组、模型组、七十味高剂量组(300mg/kg·d)、七十味中剂量组(150mg/kg·d)、七十味低剂量组(75mg/kg·d)、阿司匹林组(8.24mg/kg·d),每组各8只大鼠。每天灌胃给药1次(按体表面积法),连续14天,于造模前1h给药1次,给药剂量及途径同前。空白组和模型组用蒸馏水灌胃。第一批大鼠造模后迅速断头取脑,进行脑血栓程度(脑梗塞区每克脑组织中伊文思蓝含量：A/左脑湿重)和脑水肿程度(左/右脑湿重)的检测；第二批大鼠造模24h后,腹主动脉采血检测血液流变学各项指标(全血粘度低切、全血粘度中切、全血粘度高切、血浆粘度、红细胞聚集指数)；并用酶联免疫法检测血浆中血栓烷B2(thromboxane B2,TXB2)及6-酮-前列腺素Flα(6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-PGF1α)的水平。2、七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用及可能机制研究购买230～250g SD大鼠80只,随机分成两批,每批随机分成5组,即假手术组、pMCAO模型组、七十味低剂量组(166mg/kg·d)、七十味高剂量组(664mg/kgd)和维脑路通组(50mg/kg·d),每组各8只大鼠。每天灌胃给药1次(按体表面积法),连续14d,于造模前1h给药1次,给药剂量及途径同前。假手术组和pMCAO模型组用蒸馏水灌胃。造模前一个星期,每天上午9：00各组老鼠均进行转棒练习,每天1次,每次5分钟。第一批大鼠造模24h后断头取脑,进行脑梗死体积检测(脑片TTC染色及脑梗体积百分比计算)。第二批大鼠造模24h后进行神经功能缺损评分(Bederson评分)、神经运动功能测评(Rotarod test);评分后各组腹主动脉取血液测定血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100β蛋白的含量；取脑测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。研究结果：1、七十味珍珠丸抗实验性大鼠脑血栓形成作用及可能机制研究1.1七十味珍珠丸对实验性脑血栓大鼠脑血栓程度(A/左脑湿重)、脑水肿程度(左/右脑湿重)的影响与空白组比较,模型组A/左脑湿重、左/右脑湿重都明显升高(P<0.01)；与模型组比较,七十味高剂量组(300mg/kg·d)、中剂量组(150mg/kg·d)、低剂量组(75mg/kg·d)和阿司匹林组(8.24mg/kg·d)都不同程度的降低了A/左脑湿重和左／右脑湿重的比值(P<0.01)；而七十味各组与阿司匹林组比较均无统计学差异。1.2七十味珍珠丸对实验性脑血栓大鼠血液流变学各指标的影响与空白组比较,模型组大鼠全血粘度低切(BGH10s-1)、中切(BGH60s-1).高切(BGH150s-1)、血浆粘度(PGLUT)、红细胞聚集指数(RBCJJZS)都明显升高(P<0.0.05或P<0.01)。与模型组比较,七十味高剂量组(300mg/kg·d)、中剂量组(150mg/kg·d)、低剂量组(75mg/kg·d)和阿司匹林组(8.24mg/kg·d)都不同程度的降低了全血粘度(低切)、血浆粘度、红细胞聚集指数(P<0.05或P<0.01)；中切和高切无差异。与阿司匹林组比较,七十味中剂量组、低剂量组都降低了全血粘度(低切)、血浆粘度、红细胞聚集指数(P<0.05)。七十味高剂量组各指标与阿司匹林组比较均无统计学意义。1.3七十味珍珠丸对实验性脑血栓大鼠血浆中6-keto-PGF1α水平及TXB2/6-keto-PGF1α比值的影响与空白组比较,模型组大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α的含量明显升高,TXB2/6-keto-PGF1α比例也明显升高(P<0.01)；与模型组比较,七十味珍珠丸各剂量和阿司匹林都不同程度降低了大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α的含量,并明显降低了异常升高的TXB2/6-keto-PGF1α比例(P<0.01)；与阿司匹林组比较,七十味中剂量组(150mg/kg·d)、低剂量组(75mg/kg·d)都降低了大鼠血浆中TXB2的含量,并明显降低了异常升高的TXB2/6-keto-PGF1α比例(P<0.05或P<0.01)。而七十味各剂量组和阿司匹林组大鼠血浆中6-keto-PGF1α的含量无差异。2、七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用及可能机制研究2.1七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响与pMCAO模型组比较,七十味高剂量组(664mg/kg·d)、低剂量组(166mg/kg·d)和维脑路通组(50mg/kg·d)大鼠脑梗死体积都有不同程度的减小(P<001或P<0.05。七十味高剂量组大鼠脑梗死体积显著小于维脑路通组(P<0.01)。而七十味低剂量组大鼠脑梗死体积与维脑路通组相比无统计学差异。2.2七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损评分(Bederson评分)的影响与假手术组比较,pMCAO模型组大鼠出现了明显的神经功能缺损,评分范围在2-3分(P<0.01)。与pMCAO模型组比较,七十味高剂量组(664mg/kgd)和维脑路通组(50mg/kg·d)大鼠神经功能评分有不同程度的下降(P<0.01或P<0.01)；七十味低剂量组(166mg/kg·d)与模型组神经功能评分无统计学差异。七十味高剂量组神经功能评分低于维脑路通组(P<0.05)。2.3七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠神经运动功能测评(Rotarod test)的影响与假手术组比较,pMCAO模型组大鼠表现出较短的转棒时间(P<0.01)。与pMCAO模型组比较,七十味高剂量组(664mg/kg·d)、低剂量组(166mg/kgd)和维脑路通组(50mg/kg· d)大鼠转棒潜伏期明显增加(P<0.01)。七十味高剂量组大鼠表现出较长的转棒潜伏期,显著高于维脑路通组(P<0.01)；七十味低剂量组与维脑路通组相比无统计学差异。2.4七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100β蛋白水平的影响与假手术组比较,pMCAO模型组大鼠NSE、S-100β蛋白水平均显著升高(P<0.01)。与pMCAO模型组比较,七十味高剂量组(664mg/kg·d)、低剂量组(166mg/kg·d)和维脑路通组(50mg/kg·d)大鼠NSE和S-100p蛋白水平都有不同程度的下降(P<0.01)。七十味高剂量组大鼠NSE. S-100β蛋白水平显著低于维脑路通组(P<0.01),而七十味低剂量组与维脑路通组相比无统计学差异。2.5七十味珍珠丸对局灶性脑缺血大鼠脑组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响与假手术组比较,pMCAO模型组大鼠脑组织中SOD.CAT含量明显下降,而MDA含量显著升高(P<0.01)。与pMCAO模型组比较,七十味高、低剂量组和维脑路通组大鼠脑组织中SOD、CAT含量都有所升高,MDA含量有不同程度下降(P<0.01),其中以七十味高剂量组更为显著。而七十味低剂量组大鼠脑组织中SOD、CAT及MDA含量与维脑路通组相比均无统计学差异。研究结论：1、七十味珍珠丸对血栓诱导剂诱导的脑血栓形成具有抑制作用,可防止脑血栓形成后脑血管通透性增加,减轻脑水肿。七十味珍珠丸抗脑血栓作用机制可能与下调血液流变学各指标和调节TXA2、PGI2之间的动态平衡有关。2、七十味珍珠丸可减小局灶性脑缺血大鼠的脑梗死体积、减轻神经功能缺损程度,改善运动功能障碍；并有效降低pMCAO大鼠血清中NSE、S-100β蛋白水平,证明了七十味珍珠丸具有较好的神经保护作用,效应细胞既在神经元,又在神经胶质细胞。其机制可能与其增强内源性抗氧化酶的活性,提高机体的抗氧化能力,减轻脑组织脂质过氧化损伤有关。3、七十味珍珠丸单独用药不仅可以抑制脑血栓的形成而且具有一定的神经保护作用,可以有效的防治缺血性脑卒中。