该文综合应用现代分子生物学方法与技术,从核酸水平和蛋白质水平,对中国海洋珍稀物种青岛文昌鱼巨噬细胞迁移抑制因子(Bbt-MIF)进行较为系统的研究.以期阐明巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在免疫系统进化过程中和其它生命活动中的重要性和特殊性,为进一步认识巨噬细胞迁移抑制因子的分子进化和适应性免疫起源提供直接的实验证据支持.通过对青岛文昌鱼卵巢cDNA表达文库的序列测定和生物信息学分析,获得了两个编码文昌鱼巨噬细胞迁移抑制因子的全长cDNA序列.这两个全长cDNA序列尽管都编码巨噬细胞迁移抑制因子,但是其cDNA序列长度却相差甚远.为探究该基因在文昌鱼基因组中的存在方式和结构形式,对文昌鱼基因组进行了Southern blot和PCR扩增、测序分析.以Bbt-MIF的全长cDNA中的特异序列为引物,不同组织部位(消化道、鳃、精巢、卵巢、脊索、肌肉)的总cDNA一链为模板,做RT-PCR反应检测MIF的转录模式.RT-PCR结果显示MIF在卵巢和脊索中高表达,但是在精巢中未检测到MIF的转录.MIF在卵巢和脊索中的高表达可能与这些组织部位的免疫调节和控制细胞的生长发育有关,但是精巢中为何不表达MIF的原因有待进一步探索.以pET21b做原核表达载体,成功实现了Bbt-MIF-Ⅱ在大肠杆菌BL21(DE3)中的高表达.进一步通过阴离子亲和层析、疏水层析、分子筛层析等纯化方法获得了高纯度的Bbt-MIF-Ⅱ成熟重组蛋白.对重组蛋白Bbt-MIF-Ⅱ进行酶学活性检测发现,Bbt-MIF-Ⅱ有较强的拓扑异构酶活性和氧化还原酶活性.与哺乳动物MIF的氧化还原酶活性相反,文昌鱼MIF不能利用GSH做还原剂还原胰岛素,却能利用DTT做还原剂将胰岛素还原.总之,对文昌鱼MIF的序列分析及基因结构、转录模式和酶学活性的研究,为进一步研究其结构与功能关系及免疫调节机制进化打下了基础.实验结果充分显示了MIF在生物进化过程中的重要性、特殊性和活跃性,为我们进一步认识免疫系统的进化,尤其是在从无脊椎动物到脊椎动物这一具有重大意义的转变过程中免疫系统的进化提供了新的视野.