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目的： l、在汗腺组织三维重建过程中，通过检测角蛋白和α-SMA在不同时间点的变化，来探讨外泌汗腺细胞的发育和分化情况。 2、明确汗腺组织三维重建过程中细胞增殖的变化及增殖细胞的类型。 方法：将原代培养的汗腺细胞与Matrigel混合制成细胞混悬液注射至裸鼠腹股沟区的皮下组织中，制作汗腺细胞体内三维培养的模型。在接种后的不同时间点，1-8天及2-6周，将胶栓取出进行免疫荧光染色。l、检测 K7、K8、α-SMA、K5、K14、K15。2、检测Ki67，并且计算不同时间点胶栓的Ki67标记指数。在第4,5和6周胶栓中，通过用Ki67/K7, Ki67/K14和 Ki67/α-SMA这三对抗体行免疫荧光双染色，来鉴别增殖细胞的类型。 结果： l、在汗腺组织三维重建过程中，角蛋白和α-SMA的表达随体内培养时间不同而改变。在体内培养第1天，所有细胞均表达K5、K14且呈强阳性，K15表达呈弱阳性， K7、K8和 alpha-SMA无表达。随着时间的推移，在形成的类球型三维结构中的内层出现K7和K8的表达，但失去K5和K14的表达，外层出现α-SMA的表达，但失去K15表达。K8表达首先出现在第14天，K7及alpha-SMA出现在第21天。K15、 K14、K5分别在第14天、第21天和第28天开始消失。在培养至4、5和6周时，类球型结构形成具有类分泌部及曲导管状结构，可以通过免疫组化来区分开来。 2、汗腺细胞在体内培养第1天时Ki67的标记指数是30.53?2.47％，在培养至第2天时，Ki67的标记指数迅速达到一个峰值81.43±5.44%。随后，随着汗腺细胞培养时间的延长，Ki67的标记指数逐步下降，在第6周时降至最低2.87±1.27%。免疫荧光双染色显示：K14/Ki67双染色细胞占Ki67阳性细胞的80%，而K7/Ki67和α-SMA/Ki67双染色细胞仅占Ki67阳性细胞的10%。 结论： l、在汗腺重建过程中，角蛋白和α-SMA表达的变化与人在体汗腺组织相同。 2、在此体内三维培养模型中，汗腺细胞能迅速进入细胞分裂周期，但是很快细胞增殖开始降低而细胞分化增加，此种现象与人类汗腺组织发育过程十分相似。因此，本实验为研究汗腺的发育、分化和调控提供了一个良好的模型。