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硫酸软骨素酶(chondroitinase,ChSase),是一类主要存在于微生物体内,能将多种酸性粘多糖如硫酸皮肤素、硫酸软骨素、透明质酸等降解为寡糖及不饱和二糖的裂解酶。该酶在研究机体内硫酸软骨素糖胺多糖的功能、结构与分布方面、在治疗动脉粥样硬化、关节炎等方面有着广泛的应用前景,同时,也用于制备低分子量硫酸软骨素。低分子量硫酸软骨素对防治风湿性炎症和动脉粥样硬化方面相对于大分子量硫酸软骨素有更好的疗效。利用酶解法制备低分子量硫酸软骨素相对于目前广泛采用的物理降解法、化学降解法不需要较高的实验设备,也不会污染环境。因此,获得大量的酶活力高的ChSase具有重要的理论和现实意义,也是本实验的目的。因而本论文对产ChSase菌株的筛选、菌株产酶条件、菌株的鉴定、酶解产物等做了系统的研究。在本实验中,利用平板快速筛选和复筛从土壤中筛选出一株高产ChSase菌株,编号为12,通过对其形态和16SrRNA基因序列的比对,将该菌株鉴定为节杆菌属菌株(Arthrobacter sp.),产酶方式为分泌型表达。为了提高12号菌株的产酶水平,采用单次单因素实验方法对其碳源、氮源、无机盐及各发酵条件进行了研究,采用正交实验方法对碳源浓度、氮源浓度、无机盐浓度及pH进行了研究。得到的最佳培养基组分为(w/v):硫酸软骨素0.8%、KH2PO40.02%、酵母浸粉0.6%、MgSO4·7H200.8%、初始pH6;最适发酵条件为:按1.5%(v/v)接种量将种子菌液接入50ml/250ml的三角瓶中于25℃,150r/min振荡通气培养72h。以上述条件发酵培养食砜节杆菌时,酶活力可达3.981U/mL,为目前已报道的产酶活力较高的菌株。最后,本文初步分析了12号菌株产生的硫酸软骨素酶的酶解产物。质谱分析的结果显示,该酶降解硫酸软骨素的产物几乎全为单糖和二糖,有较高的纯度,测得的降解产物中二糖的相对分子质量约为458Da,单糖的相对分子质量为228Da。