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目的:
肝细胞癌是全世界第五最常见的恶性肿瘤，每年约50万原发性肝癌患者死亡，大多数病例发生在发展中国家，尤其是亚洲。我国每年新发病例约占全球55％，每年有35万人死于肝癌，居因所有恶性肿瘤死亡的第2位，严重危害人民的健康与生命。目前虽然肝细胞癌的确切发病及发展恶化的机制还不不是很清楚，但是现在已经证实多种风险因素与肝细胞癌的发病相关，包括慢性乙型肝炎病毒或丙肝病毒感染、肝硬化、男性、黄曲霉毒素B1(AFB1)，过度饮酒，尤其是遗传因素。
在人类长期进化过程中，由于环境的选择作用形成的基因点突变是个体遗传物质差异的重要表现之一，此即单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorph-ism，SNP)。 SNP出现的频率大约是1％，其对基因的功能无明显破坏性的影响，其对基因的功能无明显破坏性的影响，携带某些SNP的个体在一般环境中不表现异常，但在某些特定的环境因素作用下，SNP可影响基因功能发挥，从而表现出对特定疾病的易感性。单核苷酸多态性(SNPs)与基因的缺失、插入或突变有关，能够影响到蛋白的表达水平及功能，甚至导致细胞癌变的发生。
p53信号转导通路在维持基因组的稳定性和防止细胞突变等方面担当重要的角色，MDM2是p53一个重要的负面调节器，它通过绑定到p53的n-端的反式激活区域，组成一个消极的自身调节的反馈回路来抑制其转录活性。两个基因所包含的功能性单核苷酸多态性(SNP)可以影响肿瘤生物学，从而参与多种癌症的发展和预后。因此，这两个基因的单核苷酸多态性可能与肿瘤易感性及预后密切相关。Yoon YJ等人发现p53 Arg72Pro的基因突变能够提高带有慢性肝炎病毒的肝细胞癌患者的发病风险。然而，Vuolo DV等人发现p53 Arg72Pro的基因突变和肝癌的发病风险不相关。近年来，一些研究表明MDM2 SNP309T＞G多态性在不同地区和肝细胞癌的遗传易感性有相关性。但是，Leu JD等人研究表MDM2 SNP309的基因突变和肝癌发病不相关。
上述研究表明所研究的这两个位点的多态性结果不一致，而且与肝癌发展及预后是否有关联也未表明，因此也应该进一步深入研究。因此我们在p53 Arg72Pro、MDM2SNP309位点机型单核苷酸多态性检测，并考察伴有肿瘤血清学标志物、相关临床参数、治疗方案及预后情况的影响。旨在研究p53和MDM2多态性和肝细胞癌风险之间的相关性，为阐明肝细胞癌的发生发展并延长患者术后生存期提供实验依据。
实验方法:
1、本研究采用以医院为寄出的病例-对照研究方法。病例选自2007年1月至2010年12月在中国医科大学附属第一医院进行住院治疗，临床诊断明确，未经放射和抗癌药物治疗的286例肝癌新发病例;对照组为同期在同一医院体检中心进行健康体检且体检结果正常、无肿瘤病史及遗传病史且年龄与病例组相匹配的375例健康人群。在手机血液样品标本的同时，收集每个研究对象的人口学资料集临床相关参数。
2、采用酚氯仿法从抗凝血中提取基因组DNA。接下来，通过聚合没脸反应-实时荧光定量的方法，检测p53 Arg72Pro及MDM2 T309G位点基因型。
3、统计学分析:采用卡方检验比较各位点多态基因型在病例组与对照组之间的分布差异，运用Logistice回归模型计算优势比(Odds ratio，OR)及其95％可信区间(95％confidence interval，95％CI)，用OR及95％CI表示相对危险度。通过Kaplan-Meier的统计学方法预测肝癌患者经肝动脉化疗栓赛后的生存情况，通过单因素及多因素Cox模型分析影响肝癌发病的因素。所用统计软件为SPSS17.0。
结果:
1、p53 Arg72Pro位点在肝癌组中基因型分布如下:基因型Arg/Arg为61人，基因型Arg/Pro为148人，基因型Pro/Pro为77人，分别占21.3％、51.7％、26.9％;在对照组中基因型分布如下:基因型Arg/Arg为115人，基因型Arg/Pro为187人，基因型Pro/Pro为73人，分别占30.7％、49.9％、19.5％。经卡方检验证实p53Arg72Pro多态位点在对照组中基因型分布频率符合Hardy-Weinberg平衡遗传平衡定律(P＞0.05)。MDM2 T309G位点在肝癌组中基因型分布如下:基因型TT为57人，基因型TG为132人，基因型GG为97人，分别占19.9％、46.2％、33.9％;在对照组中基因型分布如下:基因型TT为124人，基因型TG为168人，基因型GG为83人，分别占33.1％、44.8％、22.1％。
2、我们发现以p53 Arg72Pro基因型Arg/Arg为参照，基因型Arg/Pro个体的发病风险增高（OR=1.391，95％CI:0.922-2.097，P=0.038），在基因型Pro/Pro中可见相关性（OR=0.003，95％CI:1.266-3.349，P=0.003）。此外，了MDM2 T309G多态基因型和肝癌发病风险具有相关性，与携带基因型TT个体相比较，携带基因型TG的能够提高肝细胞癌的发病风险(OR=1.927，95％CI:1.262-2.943，P=0.007)，携带基因型GG个体的发病风险也明显提高(OR=2.923，95％CI:1.826-4.679，P＜0.001)。
3、本研究的临床参数包括血清AFP水平、肝炎标志物(B、C、B+C、NBNC)、肝硬化、ECOG评分、肿瘤大小(≤5 cm、＞5 cm、diffuse)、Child-pugh(A、B)分级、TNM(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)分期等信息，但经统计分析后所研究的两个位点和这些临床参数均没有发现相关性。
4、在本研究中，携带p53 Arg72Pro基因型Arg/Arg的患者发展为疾病进展的中位时间为19个月，而携带基因型Arg/Pro+Pro/Pro的患者仅为12个月，两者比较具有统计学意义（log-rank P=0.004）;且基因型Arg/Pro+Pro/Pro的危害比(HR)是基因型Arg/Arg的1.614倍。携带p53 Arg72Pro基因型Arg/Arg的患者至死亡的中位时间为29个月，而携带基因型Arg/Pro+Pro/Pro的患者仅为17个月，两者比较具有统计学差异（log-rank P＜0.001）;且基因型Arg/Pro+Pro/Pro的危害比(HR)是基因型Arg/Arg的1.732倍。MDM2 T309G位点携带基因型TT的患者发展为疾病进展的中位时间为17个月，而携带基因型TG+GG的患者仅为11个月，两者比较具有统计学意义(log-rank P＜0.001);携带基因型TT的患者随访至死亡的中位时间为21个月，而携带基因型TG+GG的患者仅为16个月，两者比较同样具有统计学意义（log-rank P＜0.001）。结果提示我们p53 Arg72Pro、MDM2 T309G基因多态性或许均可以作为预测肝动脉化疗栓塞术疗效的因素之一。
5、p53 Arg72Pro(Arg/Pro+Pro/Pro vs.Arg/Arg),MDM2 T309G(TG+GG vs.TT)，血清AFP水平（ng/ml）(＞400 vs.≤400)，TNM分期(Ⅲ+Ⅳvs.Ⅰ+Ⅱ)与所研究的原发性肝癌患者相关;继续行多因素COX风险分析结果为p53 Arg72Pro(OR=1.614,95％CI:1.021-2.253,P=0.040),MDM2 T309G(OR=1.653,95％CI:1.113-2.457，P=0.013)，血清AFP水平（OR=1.981，95％CI:1.434-2.736，P＜0.001），TNM分期(OR=1.966，95％CI:1.385-2.792，P＜0.001)。对总生存期行单因素风险分析同样表明p53Arg72Pro(Arg/Pro+Pro/Pro vs.Arg/Arg)，MDM2 T309G(TG+ GG vs.TT), Serum AFP(ng/ml)(＞400 vs.≤400), TNM stage(Ⅲ+Ⅳvs.Ⅰ+Ⅱ)与所研究的肝细胞癌患者相关;最后行多因素COX风险分析表明p53 Arg72Pro(OR=1.732,95％CI:1.083-2.769,P=0.022),MDM2 T309G(OR=1.881,95％CI:1.238-2.856，P=0.003)，血清AFP水平（OR=2.066，95％CI:1.497-2.851，P＜0.001），TNM分期(OR=1.926，95％CI:1.358-2.732，P＜0.001)均不利于肝细胞癌患者的预后。
结论:
1、p53、MDM2基因可能是肝细胞癌易感的候选基因。
2、p53 Arg72Pro位点基因型Arg/Pro、Pro/Pro及MDM2 SNP309位点基因型TG、GG均可能提高中国地区肝细胞癌的发病风险。
3、p53 Arg72Pro及MDM2 SNP309的突变基因型能够掩盖术前AFP指标值的升高，并可能对肿瘤的确诊造成干扰。因此，对就诊患者进行基因型鉴定或许更具有临床意义。
4、行TACE治疗的肝癌患者携带有p53 Arg72Pro基因型Arg/Arg的患者比携带有基因Arg/Pro+Pro/Pro的患者有更长的生存期，MDM2 SNP309基因型TT的患者比携带有基因型TG+GG的患者有更长的生存期。结果提示我们p53 Arg72Pro及MDM2 SNP309基因多态性或许可以作为术前预测TACE疗效的方法之一。
5、p53 Arg72Pro和MDM2 SNP309的基因突变、血清AFP增高及TNM分期越晚不利于肝癌患者的预后。