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呼吸循环骤停是麻醉期间最严重的并发症。即使暂短的呼吸循环停止也会对大脑造成一定的损害,导致不良的预后。迄今为止,脑缺血后脑组织损伤机制的研究主要集中在:1.细胞培养;2.器官再灌注;3.夹闭血管法。虽然这些模型方法可以观察缺血组织细胞变化特征、探索出影响损伤过程的主要因素,但它们不可能用来评估复苏后综合症及远期效果。因为,大脑在呼吸循环骤停期间及复苏后的损害不但受缺血/再灌注损伤的影响,而且也受到其它脏器功能及周身体液、内环境(如炎性细胞因子)等的影响。所以,准确模拟呼吸循环骤停和复苏后的临床状态是非常重要的。 目前,已经探明多种药物预处理有大脑保护作用,但因麻醉的复杂性,这些方法在临床均难以实施。本研究采用了大鼠窒息性呼吸循环停止模型,旨在更准确模拟临床麻醉中(如脱管等)呼吸、循环停止后复苏的过程,为临床提供更加具有实际意义的理论。 氯胺酮、异丙酚是临床广泛使用的静脉麻醉药。有实验证明:静脉麻醉药抗缺血/再灌注损伤的主要机制包括:(1)抑制自由基的产生;(2)直接清除自由基,抑制脂质过氧化反应;(3)抑制缺血、缺氧导致的兴奋性谷氨酸受体活化。氯胺酮为非竞争性NMDA受体抑制剂,可以抑制细胞内钙离子升高。异丙酚能够有效抑制自由离子的产生和直接清除自由基、抑制脂质过氧化反应。 本实验采用大鼠窒息性呼吸循环停止及复苏模型,通过异丙酚、氯胺酮对大鼠预处理,探讨异丙酚、氯胺酮对完全性全脑缺血(窒息性呼吸、循环停止10分钟后复苏)大鼠大脑的保护机制。观测指标包括:1.大脑超氧化物歧化酶SOD活性、丙二醛MDA含量;血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β);2.大脑组织中细胞间黏附分子ICAM-1蛋白表达、核转录因子NF一KB活性;3.大脑组织中凋亡相关基因Bcl一2、Bo mRNA表达。实验材料与方法 一、实验材料 1.动物选择和准备 选用Wistar大鼠,雄性,体重160一2309,由本学院动物实验中心提供。实验前禁食12时,不禁水。 2.实验器材和药品 本实验在本学院动物实验中心进行。 器械:显微手术器械、多导生理监测仪(日光)、大鼠固定器、立式白炽灯、小动物呼吸机、微量输液泵、压力换能器、麻醉机、离心机、液氮灌。 药品:异氟醚(亚培公司)、肝素、肾上腺素、碳酸氢钠注射液、维库澳钱、异丙酚(捷力康公司)、氛胺酮(国产) 二、实验方法 1.模型的建立采用由美国匹兹堡大学最先报道的大鼠室息性呼吸循环停止及复苏模型(1 998),并加以简化改进。 大鼠在面罩下吸人异氟醚(4%)接受麻醉诱导,待翻正反射消失后被固定于操作台上。气管插管,接小动物呼吸机(美国产HAVER7伽心型)。机械通气,控制PE冗O:在35rxUnHg一45mmHg(通气参数:lm】/1009,40次/面n)。异氟醚吸人维持麻醉(浓度在1 .5一2.0%)。 连接6导联心电图。将热电藕探头插人右侧外耳道,测定鼓膜温度。将白炽灯t于操作台上方,控制鼓膜温度在37℃一38℃之间。 术野常规消毒后,取腹股沟切口,游离左股动、静脉。左股静脉插管后给予维库澳胺0.02m岁1009)并全身肝素化(50U/loog)。左股动脉插管(10.0土0.56)cm,前端达到升主动脉处,导管远端连接三通后,一端连接压力换能器用于连续测定动脉压,另一端留!备采血和复苏用。监测记录MAP、HR、ECG和体温。 在窒息前静注人维库澳胺和肝素(0.olm岁1009,50U/l加g),并采集动脉血(0.25血Uloog),与肝素50U/l 009、NacO3 0.ltn]阮/1009、肾上腺素4月林岁1009混合制成”复苏合剂”。 动脉采血后,停止机械通气并夹闭气管导管。2 .51土0.82分钟后心电机械分离或心电活动消失;MAP小于10mmHg。持续10分钟后,经由左股动脉插管注人”复苏合剂”。同时,开放气道机械通气。2.61士0.63分钟后自主循环建立(MAP大于60mlnHg、HR大于300次/分钟,室性心率)。复苏后持续机械通气(参数同上)至实验结束,观察期间静脉输注0.9%抓化钠溶液1园/loog.h一’。 2.实验动物分组. A组:假手术(仅麻醉及动、静脉置管,不进行窒息性循环停止)组;B组:单纯异氟醚吸人组;C组:异丙酚(枷卯肠1)组;D组:抓胺酮(Ketamine)组。C组、D组分别在诱导后腹腔内注射异丙酚(10m『1009)、抓胺酮(10mg/l加g)。每组7只。 实验结束后,立即在冰皿上断头取脑组织,分别存放于10%甲醛和液氮中。同时,由股动脉抽取动脉血离心(30以)r/而n,15而n),取上清液,放人液氮雄中保存。 3.检测指标与方法 检测指标包括:1)复苏后30、120、180分钟大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性(亚硝酸盐法)、丙二醛(MDA)含量(硫代巴比妥(TAB)法);血浆肿瘤坏死因子a(TNF一a)和白介素lp(IL一lp)(双抗体夹心ABC一E比A法)。 2)复苏后150分钟大脑组织中细胞间戮附分子ICAM一1蛋白表达(免疫组化法)、核转录因子NF一KB活性(免疫组化法)。 3)复苏后180分钟大脑组织中凋亡相关基因Bcl一2、Bax mRNA表达(RT一PCR法)。结果 1.脑组织SOD含量的变化