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黄瓜(Cucumis sativus. L)是葫芦科黄瓜属一年生草本植物,是国内外重要的蔬菜作物之一。该作物根系浅、抗旱性较差,易出现水分供应不足导致黄瓜产量和质量降低。因此,对黄瓜抗旱性研究具有重要的意义。本实验报告了外源肉桂酸(CA)缓解黄瓜幼苗的干旱胁迫的机制,研究了外源CA对干旱胁迫下黄瓜幼苗抗氧化酶及相关指标和基因组DNA甲基化的影响,同时分离了干旱胁迫下外源CA诱导的DNA甲基化差异片段,克隆、测序和序列分析。初步揭示外源CA缓解干旱胁迫的机制,为外源CA在黄瓜抗旱生产中的应用提供依据,并为其它外源物质缓解植物逆境胁迫的机制研究提供参考。以黄瓜华北生态型品种“粤秀三号”和“中农12号”黄瓜幼苗为材料,测量生长指标,选取最优的CA浓度;进行透射电子显微镜观察;测定活性氧(ROS)、抗氧化酶、抗氧化物、脯氨酸及可溶性糖的水平、CA和VA含量;研究黄瓜叶片基因组DNA甲基化的水平和状态变化,对干旱胁迫下CA预处理诱导产生的DNA甲基化差异片段进行回收、克隆和测序分析。主要结果如下:(1)外源CA缓解黄瓜干旱胁迫时对幼苗的生长、超微结构、抗氧化酶及其他相关指标的影响实验中,干旱胁迫使黄瓜幼苗生长指标均显著下降。CA预处理后再进行干旱胁迫的黄瓜幼苗中,生长指标明显上升。不同CA浓度预处理,在浓度为50μM下,植物的各项生长指标都高于其他浓度的生理指标。干旱胁迫严重抑制了黄瓜幼苗的生长,而CA预处理则缓解了干旱胁迫对黄瓜生长的抑制作用。“粤秀3号”和“中农12号”黄瓜的干旱胁迫组的叶片均出现叶绿体肿胀变圆,其膜和类囊体模糊不清,线粒体膜破损严重;而外源CA预处理后置于干旱胁迫下的叶片,叶绿体结构较正常,叶绿体和线粒体的膜相对较完整。在外源CA预处理实验中,干旱胁迫使幼苗叶片的MDA和内源H2O2含量高于对照。与干旱胁迫相比,利用外源CA预处理后再进行干旱胁迫时增强了叶片的SOD、CAT、GPX、GSH-Px、APX、DHAR、MDHAR和GR等抗氧化物酶的活性,提高了抗氧化物AsA和GSH的含量、以及脯氨酸和可溶性糖的含量,因而降低了叶片的MDA和内源H2O2含量。我们推断,外源CA预处理提高了黄瓜叶片抗氧化酶的活性,减少了活性氧含量,进而减轻了干旱胁迫对叶片膜系统的伤害,同时在基因表达水平上利用荧光定量进一步得到验证。(2)干旱胁迫下外源CA对两个黄瓜品种叶片DNA甲基化的影响本实验对两个品种的黄瓜叶片基因组DNA进行了MSAP分析,甲基化敏感扩增位点多态位点占总扩增位点数的比例在14%~19%之间。在外源CA处理实验中,有16个甲基化多态性片段MSAP-1、MSAP-2、MSAP-3、MSAP-9、MSAP-10、MSAP-11、MSAP-12、MSAP-14、 MSAP-15、MSAP-18、MSAP-19、MSAP-20、MSAP-21、MSAP-22和MSAP-27位于黄瓜染色体中,有13个甲基化多态性片段MSAP-1、MSAP-2、MSAP-6、MSAP-7、MSAP-8、MSAP-11、MSAP-15、MSAP-16、MSAP-17、MSAP-22、MSAP-23、MSAP-26和MSAP-27与黄瓜编码区有高度同源性。干旱与对照相比,在“粤秀3号”黄瓜品种中重新甲基化比率高于去甲基化比率,在“中农12号”黄瓜品种中去甲基化比率高于重新甲基化比率。CA预处理后进行干旱胁迫组与干旱组比较,在“粤秀3号”黄瓜品种中重新甲基化比率高于去甲基化比率,在“中农12号”黄瓜品种中去甲基化比率高于重新甲基化比率。