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通过无张力修补术用组织补片修复缺损的腹壁组织是临床治疗因疝气等原因造成腹壁缺损的有效手段。经编真丝织物等材料作为组织补片应用于临床的主要副作用是造成术后粘连。本课题用透明质酸钠涂层经编真丝织物,旨在降低织物表面对蛋白质的吸附,减少对细胞的粘连,为研制具有防粘连功能的医用补片提供依据。首先,在真丝织物表面接枝低分子量聚乙烯亚胺(PEI),使真丝织物表面产生大量的氨基。其次,在碳化二亚胺介导下用不同浓度的透明质酸钠溶液涂层真丝织物,研究透明质酸钠浓度对涂层后织物表面的组成、结构及理化性质的影响。接着,通过牛血清白蛋白吸附实验,研究透明质酸钠浓度对织物表面抗蛋白吸附能力的影响。最后,将小鼠成纤维细胞L-929接种于织物表面进行体外培养,研究真丝织物表面经透明质酸钠涂层改性后对细胞粘附的影响,并检测织物的细胞毒性。具体研究内容如下:(1)用碳化二亚胺激活真丝经编网眼织物表面的羧基后,在真丝织物表面接枝低分子量支化聚乙烯亚胺,用酸性橙7染色法测定织物表面的自由氨基含量的变化及接枝稳定性。用傅里叶变换红外吸收光谱(FTIR)和核磁共振氢谱(1H-NMR)检测织物表面经接枝后的结构变化,用能量色散光谱(EDS)检测接枝织物表面的N元素含量变化,并用固体Zeta电位仪检测接枝PEI后的真丝织物表面的等电点变化。结果表明:随着PEI浓度的增大,真丝织物表面因接枝PEI造成的氨基总量增多,在PEI浓度为30 mg/mL时,真丝织物表面的氨基量能够达到652±80 nmol/mg,接枝后真丝织物表面的等电点由3.53增大到5.73,FTIR和1H-NMR的测定结果证明PEI分子上的氨基有效地与真丝织物表面的羧基发生了反应,生成新的酰胺键,达到了在真丝织物表面接枝PEI,新增游离氨基,并使织物表面带上正电荷的目的。(2)其次,通过织物表面的自由氨基与透明质酸钠分子上的羧基反应,在接枝了 PEI的真丝织物表面涂层透明质酸钠。对透明质酸钠涂层的真丝织物的溶胀率和溶失率进行测定,分析涂层后织物的吸水性能和在磷酸盐缓冲液中的稳定性。用FTIR、核磁共振碳谱(13C-NMR)对涂层反应进行鉴定,用X-射线光电子能谱(XPS)和EDS检测涂层织物表面碳、氮基团含量和元素含量变化,分析表面涂层对织物表面的化学组成的影响。用热重分析检测经不同浓度透明质酸钠涂层后织物的热分解行为变化。结果表明,用不同浓度透明质酸钠对表面接枝PEI后的真丝织物表面进行涂层改性时,随着透明质酸钠的浓度增大,织物增重率显著增大,相应的织物的溶胀率显著增大。当透明质酸钠浓度为0.4%时,能在织物表面形成一层完整的透明质酸钠凝胶层。当透明质酸钠的浓度大于0.8%后,织物表面依靠化学结合及物理吸附而涂层的透明质酸钠的量都显著增多。对表面经透明质酸钠涂层后的真丝织物进行FTIR、13C-NMR波谱、热重分析及XPS的测试和分析表明,经透明质酸钠涂层后,织物表面有新的酰胺键生成。透明质酸钠通过其分子上羧基与织物表面的自由氨基反应形成酰胺键,有效地涂层于织物表面。(3)通过血清蛋白在涂层改性前后织物表面的吸附实验,比较透明质酸钠涂层改性前后织物表面吸附蛋白的能力。然后通过细胞粘附实验,研究织物表面经透明质酸钠涂层后对细胞粘附和形态的影响;用CCK-8法检测经透明质酸钠涂层后的织物表面的细胞增殖,用扫描电镜(SEM)和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞的增殖形态;最后,用织物浸提液与细胞共培养,检测经透明质酸钠涂层改性后织物的细胞毒性。结果表明,随着对真丝织物表面涂层时透明质酸钠浓度的增大,涂层后真丝织物表面对牛血清白蛋白的吸附量显著减少。表明真丝织物表面经透明质酸钠涂层改性后抗血清蛋白吸附的能力显著增强。当对真丝织物表面进行涂层改性的透明质酸钠的浓度低于0.8%时,涂层织物表面对细胞的粘附能力随透明质酸钠浓度的增大而明显减弱,粘附的细胞形态明显呈球形,细胞收缩,细胞骨架萎缩。表明经浓度为0.2-0.8%透明质酸钠涂层改性后,真丝织物表面抗细胞粘附的能力显著增强。L-929细胞接种于经透明质酸钠涂层改性的真丝织物表面进行体外培养1到3天后,细胞均呈球形并聚集生长。培养7天后,经较低浓度透明质酸钠(0.2-0.6%)涂层改性的真丝织物表面的细胞形态转变为梭形,且沿着织物表面铺展、增殖,细胞之间的连接增多;而在较高浓度透明质酸钠(0.8-2.0%)涂层改性后的真丝织物表面的细胞则始终表现为球形聚集生长。表明经较高浓度透明质酸钠(浓度大于0.8%)进行涂层改性的真丝织物表面能够持续抗细胞粘附达7天以上。用不同浓度的透明质酸钠对真丝织物表面进行涂层处理后,L-929细胞在织物表面的增殖活力均大于75%,所有织物无明显的细胞毒性。以上研究结果表明,用浓度为0.8%以上的透明质酸钠对真丝织物表面进行涂层处理后,真丝织物既能有效地抗血清蛋白的吸附,又能有效地抗细胞粘附长达7天以上,预计作为组织补片能够达到防粘连效果,显示出通过体内实验进一步验证后应用于临床的开发前景。