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目的:目前乳腺癌仍是全球女性发病率最高的癌症,其发生发展与HIPPO通路密切相关,但乳腺癌中HIPPO通路的调控机制有待于深入研究。LATS1作为HIPPO通路中核心成员通过磷酸化YAP/TAZ,抑制下游靶基因转录进而发挥抑癌作用。Suppressor of fused homolog（SUFU）是Hedgehog（Hh）通路的重要组成部分,通过参与细胞内多种信号通路的调控进而控制肿瘤的发展进程。已报道SUFU在体外抑制乳腺癌细胞生长,但其作用机制不详。本研究通过探讨SUFU调控HIPPO通路的分子机制,阐明SUFU调控乳腺癌生长的作用机理,从而揭示了乳腺癌中HIPPO通路调控的新机制,为深入研究HIPPO通路在乳腺癌进展中的作用提供新的依据。方法:1.分析TCGA公共数据库中乳腺癌患者基因表达谱,比较低表达SUFU和高表达SUFU的乳腺癌患者生存率间差异。2.慢病毒构建稳定敲低、稳定过表达SUFU的乳腺癌细胞株。包括:HCC1954、MDA-MB-231、MCF-7、T47D、SK-BR-3,免疫印迹验证其敲低、过表达效率。3.CCK-8检测乳腺癌细胞敲低、过表达SUFU后生长活力的变化。4.建立荷瘤小鼠模型:裸鼠皮下接种对照组及敲低SUFU组MDA-MB-231细胞,观察并记录肿瘤生长情况。H＆E染色、免疫组化实验检测敲低SUFU对肿瘤生长及相关蛋白表达的影响。5.转录组测序技术对稳定敲低SUFU和对照组HCC1954细胞以及稳定过表达SUFU和对照组SK-BR-3细胞进行全基因组测序,分别比较两组的信号通路和基因表达差异,并采用免疫印迹实验加以验证。6.蛋白免疫印迹检测SUFU及HIPPO通路相关蛋白表达。7.Luciferase荧光素酶报告基因实验检测SUFU对YAP转录活性影响。8.免疫荧光、核质分离实验检测SUFU对YAP出入核影响。9.免疫共沉淀检测SUFU与HIPPO通路关键组分蛋白的相互作用。10.免疫荧光检测SUFU与LATS1共定位。11.分子克隆实验构建SUFU野生型和区段缺失突变体质粒。结果:1.SUFU与乳腺癌患者生存率相关分析根据TCGA公共数据库生物信息学结果显示,SUFU表达高低与乳腺癌患者生存率高低有关,SUFU低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者（p=0.0329）,且在5年生存期时差异最显著。2.细胞模型构建通过对乳腺癌细胞中SUFU蛋白表达水平的检测,构建HCC1954、MDA-MB-231、MCF-7、T47D敲低SUFU以及MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7、SK-BR-3过表达SUFU的乳腺癌细胞模型,免疫印迹验证细胞中SUFU敲低、过表达效率。3.SUFU影响乳腺癌细胞的生长活力3.1过表达SUFU,抑制MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7、SK-BR-3细胞生长活力。3.2敲低SUFU,促进MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7细胞生长活力。4.体内实验检测SUFU对肿瘤生长影响裸鼠荷瘤模型显示:敲低SUFU显著促进肿瘤生长,经H＆E染色、IHC检测,敲低SUFU显著上调Ki67表达。5.SUFU抑制乳腺癌细胞生长活力的分子机制5.1 RNA seq表达谱测序结果显示SUFU与HIPPO通路密切相关,且敲低SUFU显著上调YAP下游基因AXL、ACSL4,过表达SUFU后显著下调YAP下游基因AXL、ACSL4,并通过免疫印迹实验得到验证。5.2敲低SUFU促进乳腺癌细胞YAP转录活性,过表达SUFU后抑制YAP转录活性。5.3敲低SUFU促进乳腺癌细胞YAP表达,促进YAP入核,过表达SUFU后抑制乳腺癌细胞YAP表达,抑制YAP入核。5.4敲低SUFU下调乳腺癌细胞P-LATS1/LATS1的比值,过表达SUFU后上调乳腺癌细胞P-LATS1/LATS1的比值。5.5敲低LATS1促进乳腺癌细胞AXL和ACSL4的表达,过表达SUFU后抑制AXL和ACSL4的表达,但在敲低LATS1细胞中再过表达SUFU后,SUFU不能抑制AXL和ACSL4的上调。5.6 SUFU与LATS1存在内源及外源的相互作用HEK293T细胞中过表达V5-SUFU、Myc-LATS1,免疫共沉淀结果显示SUFU与LATS1存在外源相互作用。在HCC1806细胞中检测到SUFU与LATS1存在内源相互作用。5.7 SUFU与LATS1共定位于细胞质MDA-MB-231和MCF-7细胞中外源过表达Flag-SUFU,Myc-LATS1,激光共聚焦结果显示SUFU与LATS1共定位于细胞质。5.8缺失174-385氨基酸区段,SUFU不能与LATS1相互作用,不能调控YAP出入核及下游靶基因转录。5.9 SUFU对乳腺癌细胞生长活力的调控依赖于YAP。结论:1.SUFU低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者。2.SUFU抑制乳腺癌细胞生长活力。3.SUFU抑制YAP出入核及靶基因的转录。4.SUFU对YAP的调控依赖于LATS1。5.SUFU与LATS1存在相互作用,且SUFU的第174-385氨基酸区段对YAP的调控起决定性作用。6.SUFU通过HIPPO/YAP调节乳腺癌细胞生长。