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本论文以植物和根际微生物次生代谢产物之间的相关性为切入点,以粉花绣线菊和滑桃树及其根际微生物为研究材料,从五个产地的粉花绣线菊二萜生物碱成分、粉花绣线菊根际微生物及其化学成分、滑桃树根际微生物及其化学成分三个方面开展实验。
为了完善粉花绣线菊(Spiraea japonica)复合群采样的系统性和全面性,对五个产地的粉花绣线菊生物碱进行分析,共分离鉴定了13个C20型二萜生物碱,其中6-hydroxylspirasine IV (3)、spiraqine (11)、6-hydroxylspiraqine (12)和生物碱季胺盐N-aminoethyl spiradine A chloride (13)为新化合物。结果表明,云南维西的粉花绣线菊中得到的生物碱为atisine型,云南腾冲、湖北神农架、浙江天目山和浙江括苍山的粉花绣线菊中得到的生物碱为hetisine型。此外,使用LC-ESI-MS方法,在浙江括苍山的粉花绣线菊中也检测到atisine型二萜生物碱。在同一种粉花绣线菊材料中含有atisine型和hetisine型两种类型的绣线菊生物碱,表明两者在生源合成上有相关性。结合染色体倍性数据,认为粉花绣线菊中生物碱类型及其染色体倍性都与地理分布有直接关系,这种关系很可能是粉花绣线菊复合群在演化过程中适应环境的结果,而且提示atisine型和hetisine型生物碱的生源合成具有相关性。
绣线菊二萜生物碱的抗真菌活性初探和酿酒酵母对atisine型二萜生物碱spiramine A/B的生物转化实验表明,在所使用的实验条件下,所试真菌对绣线菊生物碱不敏感。
采用梯度稀释法,从绣线菊和滑桃树(Trewia nudiflora)的根际土壤中分离得到21株真菌和130多株放线菌,对这些菌株的抗橙色青霉活性进行了初筛,其中4株真菌和23株放线菌表现出中等强度的抗真菌活性,1株放线菌(Tn48)有很强的活性。
绣线菊根际真菌CW菌株和F16菌株(鉴定为绣线菊盾壳霉)、滑桃树根际放线菌Tn48菌株(根据16S rDNA序列鉴定为链霉菌属)进行了次生代谢产物的分离鉴定。从CW菌株的发酵提取物中分离鉴定了化合物acuminatopyrone、麦角甾醇过氧化物和恩镰孢素类抗生素,从绣线菊盾壳霉的发酵提取物中分离鉴定了7个化合物,包括3个麦角甾醇类化合物,一个不饱和长链脂肪酸,一个脑苷脂以及两个二酮吡嗪化合物coniospiramide A (23)和coniospiramide B (24),没有发现与二萜生物碱化学结构相关的化合物。从Tn48菌株的发酵提取物中分离得到nonactic acid系列化合物(25-29)以及放线菌酮cycloheximide (30),没有发现美登木素类相关化合物。
通过部分绣线菊根际菌株对绣线菊二萜生物碱的生物转化研究、“趋化性”实验、共培养实验,没有发现对绣线菊生物碱非常敏感的根际微生物菌株。但是发现腾冲绣线菊提取物中的非生物碱部分可以明显影响绣线菊盾壳霉的麦角甾醇含量。推测绣线菊盾壳霉与粉花绣线菊之间的关系是类似病原菌与宿主的关系。绣线菊化学成分对绣线菊盾壳霉的麦角甾醇有明显影响,可能是植物对潜在的病原菌进行化学防御的表现。而绣线菊盾壳霉的麦角甾醇虽然受到影响,却没有在菌丝体微观形态和菌落外部形态等方面发生明显改变,体现出对绣线菊防御反应的适应性。滑桃树根际放线菌Tn48菌株产生具有强抗真菌活性的放线菌酮。
Tn48菌株能够同时产生nonactic acid和cycloheximide两种类型的抗生素,表明微生物菌株产生次生代谢物受环境等诸多因素的影响。
通过抗肿瘤活性测试,表明Tn48菌株的次生代谢产物具有强效抗肿瘤活性。选择了10种培养基对Tn48菌株进行定量的对比发酵,提取物进行LC-MS检测分析、抗橙色青霉活性测试以及抗肿瘤活性测试。