果树主要病毒RT-PCR检测体系的建立、优化及病毒特异DNA片段克隆测序研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanyongchao
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该研究以指示植物苏俄苹果、弗吉尼亚小苹果、光辉、GF305、昆诺藜及品丽珠为试 材,通过对影响RT和PCR扩增的若干因素的研究建立并优化了ACLXV、ASGV、ASPV、PNRSV主GLRaV五种主要果树病毒的RT-PCR检测体系,并使用该优化体系对苹果、樱桃、桃中携带的ACLSV、ASGV、ASPV和PNRSV四种病毒进行了检测,在回收纯化ASGV、ASPV和PNRSR PCR扩增的 特异DNA片段的基础上,对其进行了克隆测序研究.主要研究结果如下:1)解决了RNA提取时容易被降解和被污染这一关键问题.2)率先建立并优化ACLSV、ASGV、ASPV、PNRSV和GLRaV 的RT-PCR检测体系,并达到高效、低成本.首次比较详细地研究了RT体系中各因素对RT效果的影响.3)采用优化的RT-PCR检测体系,在北京和大连地区对苹果、樱桃、桃主要品种的ACLSV、ASGV、ASPV和PNRSV进行了检测.4)RT-PCR技术检测果树病毒的灵敏度远远高于ELISA 技术.
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