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目的肝癌是全球第五常见且未能得到有效治疗的恶性肿瘤。因其早期易发生血管转移,严重影响患者预后。肿瘤细胞脱离原癌巢、渗入血管、发生转移的过程,称为“失巢”;而细胞失巢后,因其脱离细胞间及基质的接触支持而发生程序性死亡,即“失巢凋亡”。不同的肿瘤细胞对失巢凋亡的抵抗能力不同,抵抗能力越强,侵袭转移越强。近年来,AEG1被证实为对肝癌的侵袭转移有重要作用的原癌基因;而自噬是通过吞噬消化自身部分蛋白或器官来度过不利环境的一种生命活动,那么AEG1、自噬、失巢凋亡抵抗在肝癌细胞转移中起什么作用?本课题研究AEG1能否促进自噬,进而增强肝癌细胞失巢凋亡抵抗能力,最终以促进肝癌转移,并探索此过程中主要信号途径。阐明AEG1、自噬、失巢凋亡、肝癌转移间的关系和主要机制,为寻找干预肝癌转移靶点打下基础。方法建立肝癌细胞体外失巢模型,利用质粒和小干扰RNA,分别在肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-LM3中上调和下调AGE1的表达,在模拟失巢条件下,Western blot和流式细胞学检测上调和下调AEG1表达后细胞凋亡率的改变;同时Western blot、GFP-RFP双荧光系统检测自噬水平。在上调AEG1的同时利用siRNA抑制自噬,在模拟失巢的情况下,Western blot检测自噬水平降低程度和凋亡情况,同时流式细胞学检测凋亡率。最后探讨模拟失巢情况下,通过Western blot检测AEG1调节自噬促进失巢凋亡抵抗的主要信号通路。结果肝癌细胞株SMMC-7721过表达AEG1后模拟失巢培养24小时,凋亡率明显低于对照组(P<0.05);HCC-LM3细胞中干扰AEG1的表达,模拟失巢培养24小时后,凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。SMMC-7721细胞过表达AEG1后模拟失巢培养,自噬GFP-RFP双荧光系统检测,以及WB显示自噬蛋白LC3 I型向II型转变增加,II/I型比值增大,说明自噬流增强;HCC-LM3细胞干扰AEG1表达后模拟失巢培养24小时,自噬GFP-RFP双荧光系统检测,以及WB显示LC3 I型向II型转变减少,II/I型比值降低,自噬流减弱。干扰自噬基因,SMMC-7721、HCC-LM3模拟失巢培养24小时后,凋亡率明显高于对照组(P<0.05);过表达AEG1的SMMC-7721细胞中干扰自噬基因,模拟失巢培养24小时,凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。过表达/干扰AEG1的肝癌细胞模拟失巢培养24小时后,内质网应激反应通路被激活。结论AEG1、自噬都可增强肝癌细胞失巢凋亡抵抗能力,并且AEG1可以通过提高细胞内自噬水平促进细胞失巢凋亡抵抗,进而促进肝癌细胞转移。在AEG1促进失巢肝癌细胞自噬的途径中,内质网应激反应可能参与调节。