【摘 要】
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根据已知马铃薯抗青枯菌蛋白AP1编码基因ap1序列,合成了一对特异性引物P/P,分别引入限制性酶切位点AccI及XhoI.获得了ap1基因的植物高效表达载体pHap1.以电激法将pHap1导入根
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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根据已知马铃薯抗青枯菌蛋白AP1编码基因ap1序列,合成了一对特异性引物P<,1>/P<,2>,分别引入限制性酶切位点AccI及XhoI.获得了ap1基因的植物高效表达载体pHap1.以电激法将pHap1导入根癌农杆菌LBA4404,用叶盘法分别转化马铃薯青枯病感病品种米拉(Mira)、中-5-1、金冠以及烟草感病品种NC89的无菌试管苗.经愈伤诱导及卡那霉素(kan)筛选,分别获得了16株米位、8株中-5-1、5株金冠以及40株NC89的kan抗性再生苗.经PCR、Southern和Northern-bloting等分子检测.分别选取米拉的两个转基因株系Ts-M-2和Ts-M-5,以及烟草的8株转基因植株,进行温室青枯病抗病性鉴定.根据ap1基因序列在网上的同源性分析,发现其在同源性排列中分值最高的是酸性磷酸酶蛋白家族.对ap1基因的大肠杆菌表达产物融合蛋白及其转基因植株的粗蛋白,进行酸性磷酸酶活性测定,结果表明,ap1基因的表达产物与对照相比具有明显增加的酸性磷酸酶活性.
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