松材线虫病是松树的毁灭性病害,给全世界的松树生产造成严重的损失。马尾松是我国的主要生态绿化树种,广泛种植于我国的十七个省份,是我国生态文明建设的支撑树种。马尾松独特而又重要的经济价值,使马尾松在我国扶贫攻坚和乡村振兴的进程中,发挥着不可替代的作用。然而近年来马尾松松材线虫病导致全国十七个省份的马尾松生态林大面积死亡。目前防控松材线虫病成本高昂。主要原因是松材线虫病发病机理尚未明确,难以设计出针对性强的松材线虫病精准防控措施。高感松材线虫病马尾松是揭示松材线虫病发病机理的必要材料。由于高感马尾松接种松材线虫后最终会死亡,而潜在的高感松材线虫病马尾松又无法鉴定出来,导致无法对马尾松发病机理进行深入研究。因此非常急需建立离体高感松材线虫病马尾松鉴定技术。本研究揭示了高感松材线虫病马尾松发病特征及其体内松材线虫数量变化特点,建立了离体高感松材线虫病马尾松鉴定技术,对揭示马尾松松材线虫病发病机理及松材线虫的防控具有重要的意义。主要创新性成果如下:1.揭示了不同龄期的高感马尾松苗松材线虫病发病特征。利用人工接种方法分别对半年生、一年半生、两年半生和四年生马尾松苗接种松材线虫,发现所有高感马尾松苗发病后均会死亡,不同龄期的高感马尾松苗均会表现松材线虫病典型发病症状,但开始发病时间、症状发展过程和死亡时间不同。半年生高感马尾松苗在接种松材线虫后第5 d开始发病,发病后症状扩展迅速,顶梢接种处出现病变直到整株枯萎死亡仅需要4 d左右的时间;一年半生、两年半生和四年生高感马尾松苗分别在接种松材线虫后第8 d、第10 d和第19 d开始发病,一年半生和两年半生高感马尾松苗在出现症状11 d后开始死亡,而四年生高感马尾松苗在出现症状17 d后开始死亡。一年半生、两年半生和四年生高感马尾松苗症状均表现为首先梢头接种处针叶1/4以下失水褪绿、变黄,略下垂、卷曲,有些顶下垂;随后发病症状开始自顶梢由内向外,同时向下扩展,马尾松苗1/4～1/2针叶褪绿下垂、变黄,1/4以下针叶变红;然后马尾松苗1/2～3/4针叶下垂、变黄、变红;最后3/4以上针叶变黄、变红、整株枯萎死亡。2.揭示了高感马尾松苗体内松材线虫数量变化特征。同一条件下对一年半生马尾松苗接种松材线虫,发现不同抗性水平马尾松苗体内松材线虫数量,在初始侵入数量、松材线虫增殖速度和达到最高值时间均有显著差异。接种后1～9 d,不同抗性水平马尾松苗体内松材线虫种群密度都较低;9 d后,高感马尾松苗体内松材线虫数量开始显著上升;接种17 d后,呈暴发式显著上升;到21 d时达到最大值,平均增殖速率是42.67条/g/天。中感马尾松苗体内松材线虫数量在接种13 d后开始显著上升;到接种21 d时达到最大值,平均增殖速率是1.68～12.34条/g/天。而高抗马尾松苗从接种后松材线虫数量一直很少,平均增殖速率是0.097条/g/天。该结果为建立离体高感松材线虫病马尾松鉴定技术打下基础。3.建立了高感松材线虫病马尾松离体快速鉴定技术。具体操作如下:每10棵马尾松苗为一组,剪取长约10 cm当年生马尾松侧枝离体顶梢,拔掉马尾松离体枝条全部针叶,浸泡在5000条松材线虫悬浮液中,25℃处理24 h后,用蒸馏水冲洗干净枝条表皮残余的线虫,分离出离体枝条初始侵入线虫数量,分析其显著差异,线虫数量最多的一组即为高感马尾松。