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伪狂犬0病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的毛皮动物伪狂犬病（Pseudorabies,PR）近几年在我国东北、华北等地区的13个省市流行爆发并有蔓的延趋势。近期流行病学调查报道伪狂犬毒株多呈变异情况,与市场上生产的疫苗毒株同源性相差较大,并存在接种过伪狂犬疫苗的动物仍然存在发病的情况。而该病在毛皮动物发病迅速,死亡率高的特点,且当前并无针对毛皮动物的疫苗等有效的防控手段,给毛皮动物养殖业带来了巨大的损失。所以,研究当前毛皮动物中流行毒株的变异性和针对新型毒株研制针对毛皮动物的疫苗,对PR的防控意义重大。本研究通过对2012年至2014年东北三省、山东、河北等地收集的疑似感染PRV的水貂、狐狸等病料中进行病毒分离工作,在辽宁省大连地区发病水貂的脑组织中分离出一株水貂源PRV,通过PCR鉴定、细胞增殖、间接免疫荧光实验、电镜观察、动物回归实验等证实该毒株为PRV,命名为DL14/08株。对水貂源DL14/08株病毒的全基因组序列测定,并针对全基因组与gC基因与经典毒株比对分析,建立了系统发育树,同时针对全基因组的氨基酸变异情况进行了统计。分析发现,DL14/08株与国内近两年分离出的JS-2012,ZJ01,HeN1,HNB,TJ等株相似性较高为97%100%,而与疫苗株的相似性较低为67%82%。本研究在基因层面更好的解释了近几年大规模爆发流行的猪源PR以及毛皮动物PR遗传特征和亲缘关系提供了有力的数据支持。针对毛皮动物源伪狂犬病,本实验室经过毒株的纯化与筛选最终利用DL14/08毒株作为种毒进行灭活疫苗的制备。经PK-15细胞增殖测定其病毒含量为107.10TCID50/mL,病毒纯化培养后,参照《兽用生物制品规程》制备水貂源PR灭活疫苗。灭活疫苗的制备采用0.2%的甲醛溶剂对毒液灭活,5%氢氧化铝胶作为佐剂,按一定比例配制后振摇灭活7 d,4℃保存。对制备好的灭活水貂PR疫苗进行物理性状检验、无菌检验、灭活检验,均符合标准后分别在水貂和家兔上进行安全性检验,持续监测实验动物精神状态和体温确定制备疫苗的安全性。最终获得性状良好且安全可靠的灭活水貂源PR疫苗。为了研究比较DL14/08株制备的灭活疫苗的免疫效力情况以及动物接种之后是否有不良反应,设计了三个个实验。首先通过对水貂和家兔接种不同剂量的疫苗并攻毒,从而确定水貂源灭活PR疫苗对水貂的最小免疫剂量为5×106.10 TCID50/mL。第二个实验为攻毒保护实验,利用猪源PR灭活疫苗鄂A株与本实验中所制备的水貂源灭活PR疫苗进行了比较。按照各疫苗要求剂量分别免疫水貂与家兔两种实验动物,免疫21 d后按100LD50对家兔和水貂攻毒,监测两种灭活疫苗对动物的保护效力情况。水貂源PR疫苗对水貂与家兔的保护率均为100%;商品化猪源PR灭活疫苗对家兔保护率100%,对水貂保护率为80%。第三个实验,监测了水貂在接种两种不同的灭活疫苗后血清PR中和抗体在六个月内的变化情况。在病毒含量为100 TCID50/mL的条件下测定水貂源DL14/08株疫苗刺激动物机体产生的抗体最高效价达到1:516,猪源疫苗所产生的最高效价为1:348,在免疫21 d至120 d内DL14/08株疫苗刺激水貂产生的抗体效价显著高于猪源疫苗。综合上述实验结果得出,对于毛皮动物源的PR,制备的水貂源PR灭活疫苗效力更强,攻毒保护率高,血清中抗体存在时间长,在免疫后150 d内仍可维持较高水平。DL14/08株制备的水貂源PR灭活疫苗对水貂有很好地保护效果,可以为毛皮动物伪狂犬病的防控提供技术保障。