目的：观察婴幼儿血管瘤中周细胞的形态、分布和抗原标记表达，利用增殖期血管瘤组织分离、培养间充质干细胞，进一步用荧光激活细胞分选仪分选出PDGFR-β(+)周细胞，并通过形态学、抗原标记表达等进行鉴定，以用于血管瘤的进一步研究。　　 方法：　　 (1)标本来源：共获得手术切除新鲜血管瘤标本31例，其中增殖期25例(0-1岁)，消退期3例(1-5岁)，消退完成期3例(大于5岁)；正常皮肤2例。其中13例标本(其中增殖期5例，消退期3例，消退完成期3例：正常皮肤2例)均取一部分以10％甲醛溶液固定行H-E染色和免疫组织化学等检查；2份增殖期血管瘤标本以2.5％戊二醛溶液固定行透射电镜观察。其余标本(均为增殖期)均用于周细胞的分离培养和鉴定。　　 (2)周细胞的原位研究：H-E染色观察增殖期血管瘤内皮细胞和周细胞的形态和分布；透射电镜观察增殖期血管瘤微血管的超微结构；普通免疫组织化学染色观察内皮细胞相关抗原标记(CD31)、周细胞相关抗原标记(α-SMA、PDGFR-β、Desmin、NG2)在血管瘤组织中的表达；荧光免疫组织化学双染色(CD31与α-SMA、α-SMA与PDGFR-β)，以明确上述抗原标记在增殖期血管瘤内皮细胞和周细胞的定位；　　 (3)周细胞的分离培养：采用胶原酶消化及筛网过滤法分离、培养间充质干细胞；细胞荧光免疫组化(CD45、α-SMA、Desmin、CD105、NG2、CD34、Flt-1、CD31)及流式细胞仪(PDGFR-β、CD29、CD90)进行间充质细胞的抗原鉴定；进一步用抗原PDGFR-β标记间充质干细胞后用荧光激活细胞分选仪分选出周细胞，再次用细胞荧光免疫组化(CD105、α-SMA、Desmin、CD31、CD34、Flt-1、Glut-1、CD45)及流式细胞仪(IPDGFR-β、CD90、CD29)行抗原鉴定。　　 结果：　　 (1)周细胞的原位研究：①H-E染色：增殖期血管瘤真皮下可见众多微血管团，微血管由1～3层细胞构成，由一层紧密排列的内皮细胞构成血管的内壁，其外包绕周细胞。②透射电镜：增殖期血管瘤中的微血管壁由数目不等的单层内皮细胞围绕形成，内皮细胞胞核饱满，核浆比大。内皮下基底膜结构清晰，呈板层状。基底膜内可见数量不等的周细胞，细胞核大，不规则，胞浆内可见较多线粒体、内质网等结构。内皮细胞和周细胞紧密嵌合。③普通免疫组化染色：在增殖期血管瘤中，α-SMA表达强烈，围绕微血管分布，定位于内皮层周围，呈连续的线条状；PDGFR-β表达较强，围绕微血管壁分布；Desmin、NG2表达阴性。④荧光免疫组织化学双染色：在增殖期血管瘤中，CD31表达于内皮细胞胞膜，α-SMA表达于外周周细胞胞浆；α-SMA、PDGFR-β均表达于周细胞胞浆。　　 (2)周细胞的分离培养和鉴定　　 ①间充质干细胞的分离培养和鉴定：原代培养1周，细胞贴壁生长，细胞克隆生长迅速，细胞为成纤维细胞样形态，有多个触角。原代培养2周，细胞接近融合，重叠生长，呈树枝状。细胞免疫荧光研究显示，几乎所有细胞表达CD105，部分细胞表达α-SMA，不表达CD45、CD31、Desmin、Fit-1、NG2、CD34。流式细胞仪检测显示，CD90(+)和CD29(+)细胞的百分比均为100％，PDGFR-β(+)细胞的百分比为38％。　　 ②荧光激活细胞分选仪分选PDGFR-β(+)周细胞及抗原鉴定：分选后1周，细胞贴壁生长，扩展迅速，细胞呈成纤维细胞样，有数个触角。分选后2周，细胞基本融合，成漩涡状排列。细胞免疫荧光研究显示，绝大部分细胞表达CD105和α-SMA，不表达NG2，Desmin，CD31，CD34，Flt-1，Glut-1，CD45。流式细胞仪检测显示，PDOFR-β(+)细胞的百分比为91％，CD90(+)和CD29(+)细胞的百分比仍然为100％。　　 结论：　　 (1)血管瘤的微血管丛中有大量周细胞，周细胞定位于微血管壁的基底膜中，与内皮细胞接触紧密。　　 (2)通过胶原酶消化和荧光激活细胞分选仪分选，可得到纯度较高的周细胞群。　　 (3)从细胞的分布、形态和抗原表达等各方面可证实周细胞是间充质干细胞的一个分支。