落叶松(Larix ssp.)是重要的林木树种,高效稳定的落叶松体胚再生体系能使优良品种快速繁殖,也为生理生化、遗传转化等研究打下基础。体胚不同发育阶段转录组的分析有利于了解胚胎发育的机制。以6月15日和6月25日采集的长白落叶松(Larix olgensis)未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织,胚性愈伤诱导率约30%。愈伤诱导培养基成分为:S培养基+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.3 mg/L,蔗糖20g/L,琼脂3 g/L,p H 5.8～6.0。比较在不同继代培养基上胚性愈伤组织的差异,发现较高可利用水浓度与较高植物生长调节剂(2,4-D,6-BA)浓度条件下,胚性胚柄团多处于原胚团I期或II期。而在较低可利用水浓度和较低植物生长调节剂浓度条件下,胚性胚柄团多处于原胚团III期。依次使用4种继代培养基对诱导出的胚性愈伤组织继代,逐步降低生长素与细胞分裂素的浓度并减少可利用水浓度,可使愈伤中胚性胚柄团发育至原胚团III期,且大小相似、发育同步,有利于后继体胚的生成。依次通过A、B、C三种成熟培养基诱导体胚成熟。成熟培养基A为S培养基+PEG4000 100 g/L+ABA 15 mg/L,蔗糖45 g/L的液体培养基;成熟培养基B和C分别为添加了2 g/L和10 g/L琼脂的成熟培养基A。相较于单一成熟培养基,三种培养基的成熟方案优化了体胚的形成,该方法成熟体胚形成时间为32天左右,同步率为78%,正常形态体胚比例83%。正常形态体胚生成数223个/g胚性愈伤,体细胞胚萌发率47.2%。对体胚发育不同阶段(原胚团时期、胚胎形成早期、胚胎形成晚期)分别取样,分析基因的表达水平。功能注释发现子叶胚与原胚团差异表达基因中有44种晚期胚胎发生丰富蛋白基因,16种储藏蛋白及前体基因,13种ABA相关基因和3种落叶松属生长调节因子基因表达量上调。对差异表达基因进行GO富集分析和KEGG富集分析,得出差异表达基因富集程度高的通路有:类黄酮生物合成、植物激素信号通路、苯丙烷生物合成、MAPK信号途径、二萜类生物合成及脂肪酸降解等。