基于血管活性肠肽探讨“肺肠合治法”治疗干燥综合征的机制

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ewqvcx
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目的:  理论研究主要从祖国医学“肺与大肠相表里”理论探讨治疗干燥综合征的理论依据,并总结出基于“肺肠合治法”下的五大具体治法,为临床治疗提供理论依据;实验研究主要基于血管活性肠肽(VIP)探讨“肺肠合治”法中药(麦冬地芍汤)治疗干燥综合征的机制,重点研究“肺肠合治法”法中药(麦冬地芍汤)是否可以调节机体内Th1/Th2、Th17/Treg的免疫失衡状态;另外通过给予小鼠受体拮抗剂,研究“肺肠合治”法是否通过VIP途径发挥作用,而达到调节Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡状态。  根据中医学“肺与大肠相表里”的理论,在临床运用“肺肠合治法”(麦冬地芍汤)治疗干燥综合征取得较好疗效的基础上,从对血管活性肠肽(VIP)的调节作用探讨其作用机制,观察麦冬地芍汤对Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡状态的调控作用。  方法:  选取90只雌性NOD/Ltj小鼠在第9周龄时随机取出10只小鼠,取血、颌下腺以及脾脏组织;其余部分NOD小鼠随机分为4组,分别为NS+PBS组、中药+PBS组、NS+VIP拮抗剂组、中药+VIP拮抗剂组。在16、20周龄时分别采集血清、颌下腺及脾脏组织,脾脏组织提取脾脏原代淋巴细胞,流式细胞术检测小鼠脾脏中Th1、Th2、Th17及Treg细胞占比,另外利用CBA和ELISA法检测小鼠血清中细胞因子,HE染色观察小鼠颌下腺组织病理形态学改变,Realtime PCR技术检测小鼠颌下腺VIP水平,然后进行统计学分析。  结果:  1.血清中Th1、2、17及Treg细胞因子:在小鼠16、20周龄时,与基线组相比,IFN-γ/IL-10比值呈逐渐升高的趋势,且P<0.01;与对照组相比,中药组IFN-γ/IL-10比值均降低(P<0.05);与中药组相比,16周龄中药+VIP受体拮抗剂组小鼠IFN-γ/IL-10比值升高(P<0.05),20周龄中药+VIP受体拮抗剂组IFN-γ/IL-10比值无明显变化。小鼠16周龄时,与基线组相比,IL-17/TGF-β比值明显升高的,且P<0.01;与16周龄相比,20周龄IL-17/TGF-β比值却明显下降(P<0.01);在小鼠16、20周龄时,与对照组相比,中药组IL-17/TGF-β比值降低;与中药组相比,16、20周龄中药+VIP受体拮抗剂组小鼠IL-17/TGF-β比值无明显变化,无统计学意义。  2.脾脏中Th1、2、17及Treg细胞占比:小鼠16周龄时,与基线组相比,Th1/Th2比值明显升高的,且P<0.05;与对照组相比,中药组Th1/Th2比值明显下降(P<0.05);与中药组相比,中药+VIP受体拮抗组小鼠Th1/Th2比值明显升高(P<0.01)。在小鼠16、20周龄时,与基线组相比,Th17/Treg比值呈逐渐升高的趋势(P<0.05或P<0.01);16周龄,与对照组相比,VIP拮抗剂组小鼠Th17/Treg比值升高(P<0.01),而中药组无明显变化;20周龄时,各组小鼠脾脏中Th1/Th2、Th17/Treg比值无明显变化,无统计学意义。但小鼠16、20周龄时,与对照组相比,中药组脾脏中Th17占比明显升高,而Treg占比下降(P<0.05或P<0.01)。  3.颌下腺VIP mRNA水平:与基线组相比,在小鼠16、20周龄时,颌下腺VIP mRNA呈逐渐降低的趋势(P<0.05或P<0.01);16周龄时,与对照组,中药组相比VIP mRNA明显增加(P<0.01),VIP拮抗剂组无明显变化;20周龄时,各组小鼠颌下腺VIP mRNA均无明显变化,无统计学意义。  4.颌下腺病理评分:与基线组相比,在小鼠16、20周龄时,颌下腺病理评分呈逐渐升高的趋势(P<0.05);小鼠16、20周龄时,中药组小鼠颌下腺病理评分均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。  结论:  “肺肠合治法”中药方(麦冬地芍汤)能够发挥颌下腺保护作用,正向调节颌下腺VIPmRNA水平,中药方(麦冬地芍汤)是通过VIP途径发挥作用,以改善机体血清及脾脏中Th1/Th2、Th17/Treg的免疫失衡状态。
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