原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）为最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居全球恶性肿瘤的第三位。其治愈率低，预后差，HCC的发生、发展极其快速隐匿，多数患者确诊即为晚期，且病程发展迅速，中位生存时间仅为数月。肝炎病毒，黄曲霉素，酒精等是HCC的主要诱因。侵袭与转移是导致其复发和治疗失败的主要原因。目前，HCC侵袭与转移的确切机制尚不明确。Hedgehog/Gli信号通路在哺乳动物胚胎的生长发育中极为重要，它控制着脊椎动物内胚层分化发育，是一个高度保守的中轴器官发育的形态发生通路。该信号通路与人类肿瘤的发生与发展关系亦为紧密，该信号异常激活最早在痣样基底细胞癌综合征中被证实，其后在基底细胞癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌，卵巢癌、子宫内膜癌及肝癌等肿瘤中也相继被发现。Hedgehog/Gli信号通路的异常激活在HCC的发病中发挥了重要作用。信号通路的glioma-associated oncogene homolog（Gli）, Patched（Ptch）, Smoothened（Smo）在肝癌组织中表达明显高于非肿瘤性肝组织，而该通路的抑制蛋白Hip1在肝癌组织中表达明显低于非肿瘤性肝组织；一些肝癌细胞株也存在该通路的异常表达与激活而参与肝细胞癌的增殖、凋亡等过程，该通路的抑制如KAAD-cyclopamin（KAAD-cyc）,Gli siRNA等则减少了肝癌细胞的凋亡与增殖；Smo siRNA敲除Smo后同样阻碍了肝癌细胞的体内外的生长；同时Hedgehog信号通路还参与了HCC干细胞的信号转导。同时该信号通路对多种类型细胞转移与迁移的控制及血管形成发挥重要作用，该信号通路还参与了神经胶质瘤、卵巢癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、前列腺癌等肿瘤的再生、侵袭与转移。但该信号通路参与HCC的侵袭与转移的作用及机制未见系统报道。天然药物在肿瘤的治疗中发挥着十分重要的作用。白芍是治疗肝病的重要组方之一，近年来对其保肝作用的研究逐渐增多。白芍的有效部位白芍总苷（Totalglucosides of paeony，TGP）对免疫性肝纤维化大鼠有显著的治疗作用，同时TGP通过细胞周期阻滞，抑制肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的增殖和凋亡。芍药苷（Paeoniflorin, Pae）是TGP的主要活性成分，但Pae对HCC侵袭转移的影响未见报道。基于以上的认识，本研究拟探讨Hedgehog/Gli通路介导HCC的侵袭转移作用及其可能的机制；同时考察Pae对HCC侵袭转移的影响及对HCC中Hedgehog/Gli通路的干预作用。以探讨HCC的侵袭转移新机制，寻求HCC治疗新靶点，并针对该靶点寻找有效抑制HCC侵袭转移的抑制剂。目的：1．考察Hedgehog/Gli通路介导HCC侵袭转移的作用；2．探讨Hedgehog/Gli通路介导HCC侵袭转移的可能机制；3．考察Pae对HCC侵袭转移的影响；4．探讨Pae抑制HCC侵袭转移的可能机制。方法：1．免疫组化检测正常肝组织、转移或非转移HCC患者肝组织以及人肝细胞癌Bel-7402细胞中Shh，Gli-1，p-ERK1/2和MMP-9的蛋白表达；2．Spearman相关检验分析HCC肝癌组织Shh，Gli-1，p-ERK1/2和MMP-9蛋白与HCC临床病理参数的相关性，同时分析肝细胞癌肝组织中Gli-1，p-ERK1/2和MMP-9三者之间的相关性；3．Wound-healing划痕实验检测通路配体Shh，通路抑制剂KAAD-cyc，MAPK通路的抑制剂U0126和PD98059及Pae对人肝癌Bel-7402细胞转移运动能力的影响；4．Transwell侵袭实验检测Shh，KAAD-cyc，U0126，PD98059及Pae对人肝癌Bel-7402细胞侵袭能力的影响；5．细胞粘附实验检测Shh，KAAD-cyc，U0126，PD98059及Pae对人肝癌Bel-7402细胞粘附能力的影响；6．MTT法检测Pae对肝癌Bel-7402细胞增殖能力的影响；7．Western blot检测Shh，KAAD-cyc，U0126，PD98059及Pae对人肝癌Bel-7402细胞Shh，Gli^-1，p-ERK1/2及MMP-9蛋白表达的影响。结果：1．与未侵袭转移性HCC组比较，Shh，Gli-l蛋白在侵袭转移性HCC肝癌组织表达显著增加，Shh和Gli^-1在非转移性肝细胞癌的阳性率为57.14%和44.90%，二者在转移性肝细胞癌的阳性率均升高到81.08%。同时侵袭转移性HCC肝癌组织中p-ERK1/2，MMP-9蛋白的表达也显著增加，差异有显著性，而正常肝组织中几乎不表达Shh，Gli^-1，p-ERK1/2和MMP-9蛋白；2．肝癌组织Shh，Gli^-1，p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达与HCC的侵袭转移的密切相关（P=0.035,0.001,0.001,0.008）；肝癌组织中Shh，Gli^-1和p-ERK1/2蛋白表达还与肝癌分化程度具有负相关（P=0.004,0.034,0.042）；同时肝癌组织中Gli^-1与p-ERK1/2，Gli^-1与MMP-9之间具有相关性（P=0.031, P=0.034）；3．Shh(0.13μg·mL^-1,0.5μg·mL^-1)能明显增加肝癌细胞Bel-7402的侵袭、转移及粘附；4．KAAD-cyc(1μmol·L^-1,4μmol·L^-1)则显著减少了肝癌细胞Bel-7402的侵袭、转移及粘附；5．U0126(5μmol·L^-1,10μmol·L^-1)和PD98059(5μmol·L^-1,10μmol·L^-1)均明显抑制了肝癌细胞Bel-7402侵袭与转移；6．Shh(0.13μg·mL^-1,0.5μg·mL^-1)显著增加了肝癌细胞Bel-7402的Gli^-1，p-ERK1/2及MMP-9的蛋白表达；7．KAAD-cyc(1μmol·L^-1,4μmol·L^-1)明显减少了肝癌细胞Bel-7402中Gli^-1，p-ERK1/2及MMP-9的蛋白表达；8．U0126(5μmol·L^-1,10μmol·L^-1)和PD98059(5μmol·L^-1,10μmol·L^-1)均明显抑制了肝癌细胞Bel-7402中p-ERK1/2，MMP-9的蛋白表达，但二者对肝癌细胞Bel-7402Gli^-1蛋白表达均无显著影响；9．芍药苷(6.25μmol·L^-1,12.5μmol·L^-1,25μmol·L^-1)明显减少了肝癌细胞Bel-7402的侵袭、转移及粘附，同时显著减少肝癌细胞Bel-7402中Gli^-1, p-ERK1/2及MMP-9的蛋白表达。结论：1．Hedgehog/Gli信号通路参与了HCC的侵袭转移;2．Hedgehog/Gli信号通路参与HCC的侵袭转移的机制可能与该通路激活后，上调MAPK/ERK信号通路、增加MMP-9蛋白的表达有关；3．Pae能显著抑制HCC的侵袭转移；4．Pae抑制HCC的侵袭转移的机制可能与抑制Hedgehog/Gli信号通路的激活、抑制MAPK/ERK通路的活性和抑制MMP-9表达有关；提示，Hedgehog/Gli信号通路可能成为治疗HCC的新靶点，并将为揭示HCC侵袭转移的新机制及发现新的抑制药提供重要理论依据。