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淀粉是人类重要的能量来源和工业原料,马铃薯(Solanum tuberosum L.)淀粉以其特有的物理和化学性质成为了不可替代工业原料。尽管我国是最大的马铃薯生产国,但与发达国家相比,我国马铃薯产业发展水平较落后,其重要的原因之一是马铃薯淀粉加工品质低下,生产效率不高。
由于马铃薯为四倍体无性繁殖作物,天然杂交与基因重组机会小,自然突变体极少,故常规育种方法的目的基因极其匿乏,育种难度大。而引进品种又存在自然和生产条件的不适应,无法解决淀粉加工品质和生产效率低下的问题,分子育种和常规育种结合正成为解决这一问题的途径。因此,研究马铃薯淀粉生物合成途径,发现、识别和改良马铃薯基因,由此来创新种质,成为解决产业发展存在问题的根本途径。
在植物淀粉合成中,腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是一个起关键性调节作用的酶。它催化合成的ADP-葡萄糖是合成直链和支链淀粉的底物。在细菌合成糖原的过程中,glgC基因的作用等同于植物中的AGPase编码基因,并且对昼夜调控不敏感。已有学者将定点突变的glgC转入马铃薯中以提高淀粉含量。本研究将双拷贝glgC在马铃薯体内表达以替代对昼夜周期调控敏感的马铃薯AGPase,探索不同拷贝数glgC对马铃薯淀粉生物合成的影响。
本研究获得以下结果:一、构建了由CaMV35S+GBSSI启动的双拷贝glgC植物表达载体pC-YXI;二、构建了山GBSSI启动子启动的双拷贝glgC植物表达载体pC-YXII;三、通过农杆菌转化系统将构建的两个植物表达载体转化至马铃薯体内;四、通过PCR、Southern blot检测方法,获得含不同glgC拷贝数的转基因马铃薯阳性转化子苗10株;五、将筛选出的阳性马铃薯转化子试管苗经过炼苗后,移栽至花盆内,获得马铃薯块茎。