辛伐他汀对脂肪干细胞增殖和分化的影响

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目的:研究辛伐他汀(simvastatin)对脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖和成骨分化的影响,RT-PCR检测其成骨分化过程中骨相关基因的表达,探讨其作为组织工程细胞修复牙槽骨缺损的可行性。  方法:无菌条件下复苏ADSCs,接种至细胞培养液中培养,待细胞生长至瓶底的90%时进行传代,取生长良好的第3代ADSCs在成骨诱导培养液中诱导培养,同时加入5组不同浓度的辛伐他汀(A组10-3μmol/L、B组10-2μmol/L、C组10-1μmol/L、D组1μmol/L、E组0μmol/L)作用细胞,用四唑盐比色法(MTT)检测5组不同浓度的辛伐他汀对ADSCs的增殖作用,用碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性,茜素红染色鉴定矿化结节,用RT-PCR方法测定骨钙蛋白(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的表达。  结果:统计学分析低浓度的辛伐他汀(10-3μmol/L、10-2μmol/L、10-1μmol/L)对ADSCs有促进增殖的作用,高浓度的辛伐他汀(1μmol/L)对ADSCs的增殖起抑制作用,其中10-1μmol/L组与对照组相比差异显著。适宜浓度的辛伐他汀能够促进ADSCs向成骨细胞分化,(10-3μmol/L、10-2μ mol/L、10-1μmol/L)辛伐他汀能促进ADSCs的ALP的活性,其中,10-1μmol/L的辛伐他汀促进ALP活性的作用最明显。实验组骨相关基因(OPN)和(OCN) mRNA高表达。茜素红染色后显微镜下可见矿化结节。  结论:低浓度辛伐他汀可促进ADSCs的增殖,高浓度辛伐他汀抑制ADSCs的增殖,适宜浓度的辛伐他汀可促进ADSCs的成骨分化。
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