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转基因技术已发展成为植物育种和分子设计的一种重要手段,当前在葡萄育种中应用的限制因子是再生体系。虽然过去有较多葡萄组织培养的报道,但大多采用侧芽培养的方法,不适合转基因再生要求。本试验以鲜食葡萄品种京亚和克瑞森无核的成年态为试材,经消毒、继代扩繁后,进一步以无菌试管苗的叶片为外植体,建立了叶盘法再生的技术体系,并为转基因技术应用做了部分前期探索。得出以下结论:1.对单芽茎段采用0.1%升汞和2%NaClO进行消毒,设计了不同消毒时间的组合,实验表明用2%NaClO消毒20 min灭菌效果最好。取材在4月中旬至5月中旬污染最低。2.初代培养基:京亚采用MS+6-BA 1.0mg/L,克瑞森采用MS+6-BA 2.0mg/L都能有效的诱导腋芽的萌发。继代增殖培养基:采用MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L可以有效的诱导腋芽的增殖,增殖倍数在5倍以上。3.克服玻璃化:降低温度、增加琼脂含量都能够缓解组培苗的玻璃化,但都不能完全抑制玻璃化,随着温度的升高及继代次数的增加,玻璃化现象仍然严重。在继代增殖培养基中加入0.4mg/L的活性炭,虽然增殖倍数有所降低,但却可以完全抑制玻璃化,同时还可以为叶盘再生提供稳定而健壮的外植体材料。4.葡萄叶盘再生体系:克瑞森无核的叶盘再生最佳培养基为MS+6-BA5.0mg/L+IBA0.05mg/L,再生率为11.2%;京亚叶盘再生的最佳培养基为MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.05mg/L,再生率为65.2%。前2片展开叶是最理想的外植体,只切断叶片主脉而不将叶片完全切断、将叶片背面接触培养基也可以提高再生率。5.叶片再生芽生根的适宜培养基为1/2MS+IBA 1.0mg/L+7g/L Agar+30g/LSuc,处理须根多,茎杆粗壮,生根效果最为理想。6.遗传转化摸索发现:卡那霉素不适合京亚叶片再生筛选,只适合于生根筛选,浓度为10mg/L;Cef抑菌浓度为300 mg/L。