当角膜缘干细胞遭到不可逆性损害失去代偿能力后就会出现角膜上皮持续性缺损、角膜基质溶解溃疡、角膜严重的新生血管化和疤痕化以及角膜上皮结膜化等表现，现称之为眼表面异常。 眼表面异常的治疗非常棘手。过去的保守疗法以及传统的角膜移植疗效都很差。上世纪七十年代末认识到这类疾病可能与角膜上皮的异常有关后，Thoft率先开展了自体结膜移植治疗眼表面异常，并取得了一定的成功。此后又相继出现角膜上皮成型术（异体）、自体角膜缘移植和异体角膜缘移植，这些手术方法的开创和发展使得眼表面异常的治疗更趋完善。 羊膜移植是近年来临床上治疗眼表面异常的又一新的手术方法。据文献报道羊膜移植对复发性胬肉，急性或亚急性期眼热化学烧伤，伴严重疤痕增殖的重度烧伤眼以及其它一些慢性炎症性眼病均有一定的疗效。但到目前为止关于羊膜移植改善眼表面异常的机制、羊膜移植方式的选择以及羊膜上皮细胞对角膜再上皮化的影响尚有大量不明和有争议的问题。为进一步阐明不同的羊膜移植方式 浙江大学硕士学位论文是否会影响手术的成功率，是否会影响羊膜移植对改善眼表面异常的作用机制，羊膜上皮细胞存在与否是否会影响移植后角膜的再上皮化等，我们采用动物眼碱烧伤模型对此进行了研究。 实验对象及方法 采用白兔进行眼碱烧伤模型的制作。制作方法参照Tsens等人建立的方法进行改进，通过板层切除角膜缘联合氢氧化钠烧伤角膜来达到制作目的。模型制各后，进行不同方式的保存人羊膜移植即羊膜基质面朝下、基质面朝上和去上皮羊膜移植。术后观察并记录各眼角膜再上皮化的过程。术后半月评价各眼角膜新生血管化程度，通过印迹细胞学检查评价角膜上皮结膜化程度，并取标本进行组织学检查（包括 HE、PAS和 Masson三色染色），观察角膜的形态学改变。 实验结果二，动物模型 实验采用了18只白兔34只眼。在饲养过程中有4只兔子（含8 只实验眼）死亡，剩余的26只烧伤眼36．85L9．26天内角膜被血管膜覆盖，上皮缺损消夫。模型眼最终表现为严重的角膜混浊、严重的角膜新生血管化和疤痕化。印迹细胞学检查提示角膜表面结膜化。取模型眼（1只眼）进行组织学检查，可见角膜上皮形态异常，角膜基质胶原变形，并有新生血管侵入及炎性细胞的浸润。2．不同方式的羊膜移植 将剩余的13只白兔共25只模型眼，分成三组进行不同方式的羊膜移植：即羊膜基质面朝下移植（9只眼）、羊膜基质面朝上移植（9只眼）和去上皮羊膜移植（7只眼）、在羊膜移植术中和术后有 －3－ 浙江大学硕士学位论文6只白兔（12只实验眼）死亡，只剩余7只白兔共门只眼完成整个实验。其中包括羊膜基质面朝下组5只眼、基质面朝上组5只眼和去上皮羊膜组3只眼。所有兔眼在羊膜移植术中没有出现并发症。羊膜移植术后除一例兔眼因下睑内翻而致植片脱落，予以再次羊膜移植外，其余兔眼均没有出现植片脱落或感染等并发症。3．角膜再上皮化时间 不同方式羊膜移植术后，羊膜基质面朝下移植组在8．6L．52大内完成了角膜再上皮化，基质面朝上移植组和去上皮羊膜移植组则分别用了8．4L2．07天和9．0LI．73天完成了该过程。三种羊膜移植方式在角膜再上皮化时间上无统计学差异（P）0．05）。4．角膜新生血管化程度 角膜新生血管化程度分0一＋＋＋＋。术前除羊膜基质面朝上组有1例角膜新生血管化程度为＋＋＋以外，其余的均为＋＋＋＋。术后半月对角膜新生血管化程度进行再次评价。三种不同羊膜移植方式均使部分角膜的新生血管化程度较术前减轻，其中羊膜基质面朝下和朝上组各有2只眼改善了3个等级，去上皮羊膜组有2只眼改善了2个等级。不同羊膜移植方式之间角膜新生血管化程度无统计学差异 （P＞0．05）。5．角膜上皮结膜化程度 羊膜移植术后半月，对所有的兔眼角膜进行不同象限的印迹细胞学检查。除基质面朝上组有1 只眼没查到杯状细胞外，其余角膜均有数量不等的杯状细胞出现。根据杯状细胞的计数将角膜结膜化程度分成0～＋＋＋＋。与术前比较，三种不同方式羊膜移植术后角膜上皮结膜化程度均有一定程度的下降。其中基质面朝上组有1 只眼无 －4－ 浙江大学硕士学位论文一结膜化发生，l只眼改善了2个等级。基质面朝下组和去上皮组则各有2只眼改善了2个等级。三组在术后角膜上皮结膜化程度上无统计学差异（P＞0．05）。6．组织病理学检查 不同方式羊膜移植术后半月，取各组兔眼角膜进行组织学检查，其中包括基质面朝下组5只眼，基质面朝上