人参为五加科人参属植物，药用历史悠久。研究表明人参皂苷是人参的主要次生代谢产物，具有广泛的生理和药理活性。但人参中人参皂苷含量较低，限制了人参皂苷的利用。近些年来，利用代谢工程和基因工程以提高人参皂苷含量已经成为研究热点。人参皂苷合成的前体物质为2，3-氧化角鲨烯，其在达玛烯二醇合成酶（DS）作用下生成达玛烯二醇，再通过原人参合成酶（D12H）生成原人参二醇，原人参二醇经过糖基化反应生成原人参二醇型皂苷。本研究目的在于通过基因工程手段对人参皂合成途径进行调控，从而提高人参皂苷含量。本研究为提高原人参二醇合成酶基因D12H（即达玛烯二醇C-12羟化酶）的表达量，对人参中D12H基因进行PCR扩增，构建D12H植物过量表达载体。再通过发根农杆菌A4介导，将含有D12H基因的过量表达载体转入人参根片中，诱导人参发根成功后得到过量表达人参D12H基因的人参发根系。并分析得到的人参发根中皂苷含量的变化，研究过量表达人参D12H基因对人参发根中皂苷含量影响。论文的主要研究内容和结果如下：1. PCR扩增D12H：从实验室继代培养的发根中提取人参发根总RNA，RNA反转录得到人参发根cDNA，根据Genebank中以登录号：JN604536的人参D12H基因的序列设计特异性引物，以cDNA作为模板，进行D12H的PCR扩增，成功的克隆出了D12H基因。2.植物过量表达载体的构建：用限制性内切酶对D12H基因与植物过量表达载体pBI121进行双酶切，用T4DNA连接酶连接D12H和表达载体，成功构建了过量表达载体pBI121-D12H。3.植物工程菌的构建：采用冻融法把重组质粒pBI121-D12H转化至发根农杆菌Ａ４感受态细胞中，构建工程菌A4-pBI121-D12H。4.人参遗传转化：用植物过量表达工程菌A4-pBI121-D12H侵染人参根片，诱导出含有过量表达D12H的人参发根系。提取过量表达发根系的总RNA，进行RT-PCR鉴定，确定发根诱导成功。5.人参发根皂苷含量分析：对得到的过量表达发根系和对照组进行总皂苷的测定，过量表达发根系的总皂苷含量高于对照组皂苷含量，利用液相色谱分析人参单体皂苷Rg1，Re，Rb1的含量，结果表明过量表达组Rg1，Re，Rb1含量均高于对照组。