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在国内及国际贸易中,羊肉中掺杂价格便宜的猪肉、鸭肉,以次充好的欺骗现象屡见不鲜,引发了社会各界的关注。因此,需要建立一种特异性高、操作简便、适用性广的动物源性鉴别方法,以其为肉品的监管提供必要的技术支撑。本研究根据本地掺假羊肉的特点,以羊、猪及鸭肉为研究对象,采用4种常用的动物基因组DNA提取方法提取基因组DNA,并对提取的DNA分别进行纯度、浓度检测、琼脂糖凝胶电泳检测和PCR分析,从而筛选出适合的DNA提取方法。通过对3种肉基因序列的分析比较设计特异性鉴别引物,进而对PCR反应条件的优化,最终建立了检验羊、猪、鸭肉的三重PCR检测体系,并利用荧光定量PCR方法进行了验证。具体研究结果如下:4种动物基因组DNA提取方法均能从羊肉制品中提得DNA,其中试剂盒法提得的DNA浓度及纯度较高,完整性较好,操作相对简单,且毒性相对较小,故选择试剂盒法作为羊肉及其产品DNA的提取方法较为适合。基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计出了适合于羊、猪、鸭鉴别的高特异性引物。采用新设计的鸭引物及最佳多重引物混合配比分别对羊、猪、鸭的基因组DNA样进行扩增,得到了 331bp、398bp、647bp大小的目的片段,均无非特异性扩增,优化后各引物之间的最佳比例为:通用上游引物:羊鉴别引物:猪鉴别引物:鸭鉴别引物=1:0.5:0.2:0.2。检测了建立的三重PCR方法的灵敏度:羊的检测灵敏度为0.007μg/μL左右,猪的检测灵敏度为0.012μg/μL左右,鸭的检测灵敏度为0.0028μg/μL左右。为了验证本文建立的三重PCR方法的特异性与适用性,利用食品中羊肉、猪肉、鸭肉鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法进行肉种鉴别,结果与本研究所建立的三重PCR检测方法结果完全一致。采用双随机的方法对市场上销售的50份样品进行三重PCR方法鉴别,结果均与标注的成分一致。说明建立的三重PCR鉴别方法特异性和适用性好。综上所述,本研究基于多重PCR技术建立的三种肉制品肉种来源鉴别方法,可一次实现对羊肉中猪肉和鸭肉等掺假物种的定性筛查,提高了检测效率。经过实际样品的检测并利用定量PCR法进行了验证,表明建立的这种单引物三重PCR检测方法可以准确快速的对羊、猪、鸭进行检测并具有特异性高、适用性强、操作简便等特点,为相关羊肉制品的监管提供了技术支撑。