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副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）是海洋细菌中主要的人类病原体,其爆发和感染次数不断增加,且在食品加工设备和水产品表面上具有形成生物被膜（Biofilm,BF）的能力。生物被膜是复杂的微生物群落,它们被包裹于由多糖,蛋白质和胞外DNA（e DNA）组成的自产胞外聚合物（Extracellular polymeric substances,EPS）中。虽然EPS维持了副溶血性弧菌生物被膜的结构稳定性,但其化学成分各自的功能作用仍不明确。因此,本研究旨在阐明EPS的关键化学成分e DNA在副溶血性弧菌生物被膜形成过程中的作用。本研究有助于进一步了解副溶血弧菌生物被膜的形成机理,为食品工业开发环境友好型的生物被膜清除方法提供新的思路。本文首先对不同来源和基因型的副溶血性弧菌形成生物被膜的差异性进行研究;其次,以副溶血性弧菌ATCC17802为模式菌株探究了e DNA在副溶血性弧菌生物被膜形成过程中的作用,结果显示可能存在其他胞外基质成分维持成熟生物被膜的结构稳定性或e DNA与其他胞外基质成分共同构建成熟生物被膜的骨架结构。最后,进一步探究副溶血性弧菌生物被膜形成过程中其他胞外基质成分是否起作用以及与e DNA的关系。本文主要研究内容及研究结果如下:1.不同来源和基因型的副溶血性弧菌形成生物被膜差异性研究本研究运用结晶紫染色法分析了不同来源（临床和食品）和基因型（致病和非致病）的VP生物被膜动态形成过程,并比较临床分离与食品分离的VP菌株BF形成能力以及致病性和非致病性VP菌株的BF形成能力。结果显示临床分离和致病性的VP菌株生物被膜形成能力大于食品分离和非致病性的VP菌株。临床分离和致病性的VP菌株BF的成熟周期为24h且具有较小的变异系数,食品分离和非致病性的VP菌株BF的成熟周期为48h且变异系数大。此外,本研究也测定了VP的最大生长速率μmax,Spearman相关分析表明,VP菌株的μmax与来源和基因型之间不具有相关性（rp=0.095,P>0.05,rp=-0.235,P>0.05）。2.eDNA在副溶血性弧菌生物被膜形成过程中的作用研究本研究首先运用结晶紫染色法、激光共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscopy,CLSM）结合ISA软件分析和扫描电镜（Scanning electron microscopy,SEM）的方法观察副溶血性弧菌ATCC17802生物被膜的生长,结果表明ATCC17802在24h形成成熟的生物被膜。其次结晶紫染色法评估DNase I酶酶处理和外源DNA的添加对副溶血性弧菌生物被膜形成的影响,结果表明e DNA介导VP菌株的初始粘附,促进生物被膜的早期发育。DNase I酶酶处理实验还发现早期生物被膜对酶处理十分敏感,但成熟的BF则不能被DNase I酶酶显著破坏,这表明可能存在其他胞外基质成分参与VP成熟生物被膜的构建。3.eDNA与其他胞外基质对副溶血性弧菌生物被膜结构稳定性的作用研究本研究首先利用化学方法分析了VP生物被膜形成过程中e DNA、胞外蛋白和胞外多糖含量的变化,Pearson相关性分析表明e DNA和胞外蛋白的含量与副溶血性弧菌生物被膜的形成呈正相关（P<0.01）,而胞外多糖的含量与生物被膜的形成不具有相关性。激光共聚焦显微镜结合ISA软件分析评估DNase I酶酶、蛋白酶K及其联合（DNase I酶-proteinase K）对生物被膜的作用,结果显示单独的DNase I酶酶或者蛋白酶K不能显著破坏成熟的VP生物被膜,而DNase I酶-proteinase K处理后导致成熟生物被膜的崩解,这表明e DNA和胞外蛋白是成熟VP生物被膜的骨架结构,二者共同维持生物被膜的结构稳定性。拉曼光谱（Raman spectroscopy,RM）分析表明e DNA环结构的破坏和蛋白质二级结构的破坏是导致生物被膜崩塌的主要原因。