论文部分内容阅读
目的:探讨ID-1特异的RNAi对人肝癌HepG2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,以及其对移植瘤中ID-1及p-ERK基因表达的影响。探讨ID-1与ERK1/2信号通路在裸鼠皮下种植瘤增殖中的作用。方法:在BALB/C-nu系雄性裸鼠右腋皮下注射HepG2细胞5×106/0.2m l建立荷人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型15只。待肿瘤直径约8mm时,把其随机分为3组,空白组、阴性对照组、阳性组,每组5只。阳性组在后1天、4天、7天、11天、15天分别注射甲基化的siRNA-ID-1 4nmol/100ul,对照组注射CONTROL- siRNA4nmol/100ul,空白对照组注射生理盐水100ul。期间每周测量肿瘤体积,制作肿瘤生长曲线。28天后处死裸鼠,制作肿瘤组织标本,进行常规病理学检查,半定量RT-PCR检测ID-1.p-ERK1/2mRNA的表达情况,通过免疫组织化学来检测ID-1.p-ERK1/2的蛋白表达。结果:裸鼠成瘤率100%,5天后在皮下摸到小结节。注射甲基化Si-ID-1一周后阳性组的裸鼠肿瘤生长速度明显减慢,瘤体增大不明显,阴性对照组和空白组肿瘤体积继续生长,体积每周都有增大。病理组织学显示:肉眼观察,阳性组的裸鼠肿瘤体积明显较阴性对照组和空白对照组小;显微镜下观察,实验组的肿瘤细胞呈片状变性坏死,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,坏死的肿瘤组织呈现均质、红染表现,周围肿瘤细胞与对照组相比残留较少,空白对照组及阴性对照组HE染色见瘤细胞排列密集,细胞界限不清,生长活跃,核大深染,有较多核分裂象。RT-PCR显示si-ID-1组ID-1.p-ERK1/2mRNA表达明显降低,与阴性对照组和空白组比较,差别具有统计学意义(P<0.01)。免疫组化显示实验组的ID-1.p-ERK1/2阳性反应率较空白对照组及阴性对照组明显减少,差别具有统计学意义。结论:人肝癌细胞HepG2移植瘤中ID-1、p-ERK1/2均高表达,应用甲基化的siRNA靶向抑制ID-1基因可以显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,使其增长速度变慢,体积变小。并且使得ID-1及p-ERK1/2的表达均降低。推测由于ID-1的过表达导致ERK1/2持续活化,导致细胞在转录水平发生变化,细胞增殖失控、凋亡受阻是肝癌细胞最初癌变的分子机制。而si-ID-1抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡的机制可能是通过下调ID-1的表达从而阻滞ERK1/2通路的激活。ID-1可能成为肝癌基因治疗的一个新靶点。