目的:Taqman探针荧光定量PCR是目前检测结核分枝杆菌应用广泛的临床基因诊断定量方法,虽然该技术已经比较成熟,但是如何提高阳性率,降低成本,缩短反应时间,仍是亟待解决的一个重要问题。因此本题拟利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种敏感特异、快速价廉且能实现广泛应用的结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法;同时对以不同标本处理方法获得的检测模板进行检测,为寻求标本处理的最佳方法进行探索。方法:采用基因克隆技术,将结核分枝杆菌senX3-regX3 IR基因片段插入到载体pMD18-T,构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品。根据结核分枝杆菌senX3-regX3 IR的编码基因序列自行设计合成二聚体蝎型探针,优化定量PCR体系,建立以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并对其进行方法学评价,同时用该方法对经煮沸法、Chelex 100 resin处理法、DNA抽提试剂盒法平行处理的临床标本进行检测且和Taqman技术建立的方法进行比较。结果:1)成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR。2)建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法,其线性检测范围:101-107copies/μl;灵敏度:100copies/μl;重复性试验结果为批内CV为2.35%,批间CV为3.17% ,天间CV为4.06%;特异性:100%;