【摘 要】
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目的:通过比较六种不同的腐植酸钠样品在不同的808nm激光输出功率及不同浓度下的体外光热性能,选择出光热性能最佳的腐植酸钠样品及与其对应的相关参数。通过探究最佳腐植酸钠样品对人口腔角质细胞（HOK）及人口腔鳞癌细胞（HSC-4）的增殖/毒性作用,初步确定其对口腔正常细胞的安全性以及对肿瘤细胞是否具有增殖作用或暗毒性,从而为后续的相关实验提供数据基础,以加快腐植酸钠介导的光热疗法（photother
【基金项目】
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山西省卫生健康委科研课题（2018017）； 山西省“1331工程”协同创新中心建设计划经费； 量子光学与光量子器件国家重点实验室（山西大学）开放课题（KF201604）；
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目的:通过比较六种不同的腐植酸钠样品在不同的808nm激光输出功率及不同浓度下的体外光热性能,选择出光热性能最佳的腐植酸钠样品及与其对应的相关参数。通过探究最佳腐植酸钠样品对人口腔角质细胞（HOK）及人口腔鳞癌细胞（HSC-4）的增殖/毒性作用,初步确定其对口腔正常细胞的安全性以及对肿瘤细胞是否具有增殖作用或暗毒性,从而为后续的相关实验提供数据基础,以加快腐植酸钠介导的光热疗法（photothermal therapy,PTT）在口腔癌治疗中的临床应用。方法:对宝清风化煤、奇台风化煤及土左旗风化煤三种不同矿源分别采用Na4P2O7溶液和Na OH溶液进行萃取以获得六种腐殖酸钠样品。采用808nm激光,输出功率分别为1W,2W,3W的近红外激光照射不同浓度（0.125mg/m L、0.25mg/m L、0.5mg/m L、1mg/m L、2mg/m L）的六种腐植酸钠样品10min,考察样品的体外光热性能。以HOK为研究对象,考察最佳腐植酸钠样品对口腔正常细胞的安全性,以HSC-4为研究对象,考察最佳腐植酸钠样品对癌细胞的增殖作用或暗毒性,采用CCK-8法检测HOK和HSC-4的相对存活率。结果:1.在宝清风化煤、奇台风化煤及土左旗风化煤三种不同矿源中,从奇台风化煤中萃取出的的腐植酸钠的量最多。采用Na4P2O7溶液比Na OH溶液进行萃取可以获得更高浓度的腐殖酸钠,尤其是对于宝清风化煤和土左旗风化煤这两种,萃取量分别较Na OH提高了3.3倍和4.3倍。获得的腐植酸钠样品溶液常温保存3个月内也未见任何沉淀物形成或变浑浊。对于宝清风化煤、奇台风化煤,NAOH萃取得到的腐植酸钠光热性能更佳,土左旗风化煤则相反。在808nm激光照射下,六种腐植酸钠样品都表现出明显的光热性能,且随时间、浓度及功率的增加而增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中腐植酸钠样品S5的光热性能最好。当激光输出功率为2W且腐植酸钠样品浓度为0.5mg/ml时,样品S5和S6的升高的温度在理想肿瘤温度敏感范围内（43℃-50℃）。2.对于HOK,当腐植酸钠样品S5浓度≤0.5mg/ml时不同时间点的细胞相对存活率均保持在90%以上。而浓度达到1～2mg/ml时,细胞相对存活率明显下降,孵育48h后,细胞相对存活率分别为80.42%和64.18%;孵育72 h后,细胞相对存活率分别降至75.06%和59.82%,与对照组存在显著性差异（P<0.05）。对于HSC-4,浓度≤2.0 mg/ml时不同时间点的细胞相对存活率均保持在90%以上。结论:1.在宝清风化煤、奇台风化煤以及土左旗风化煤三种不同矿源中,奇台风化煤中的腐植酸含量最高,采用Na4P2O7萃取比用NAOH萃取可以提高矿源的利用率。腐植酸钠样品不仅具有良好的分散性能,而且具有较佳的稳定性。腐植酸钠样品的光热性能与浓度和激光输出功率呈正向关。综合考虑下,腐植酸钠样品S5是体外光热性能最佳的腐植酸钠样品,其适宜的参数如下:激光输出功率为2W,浓度为0.5mg/ml。2.腐植酸钠样品S5的浓度≤0.5mg/ml时对HOK基本无毒,对口腔正常细胞具有良好的生物安全性。在≤2.0mg/ml的浓度范围内,腐植酸钠样品S5对HSC-4既没有明显的增殖作用也无暗毒性。结合体外光热性能实验,浓度为0.5mg/ml的腐植酸钠样品S5适合用于后续光热杀伤癌细胞的相关实验研究。
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