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松材线虫病(pine wilt disease)是松树的毁灭性病害，尽早地对病树作出正确地诊断是控制病害蔓延的首要条件。本研究针对松材线虫病木的分子诊断问题，通过对马尾松病木的切片染色，确定线虫在松木中的分布状态，从而确定取样部位；运用分子生物学技术，对现存的马尾松病木中松材线虫的PCR检测体系进行了优化。主要取得了以下成果：
1、建立了马尾松病木中线虫的染色技术，将木头中的线虫染成深红色，而木头本身为浅红色或米黄色，具有清晰的对比度，显微镜下可以观察到线虫在松木中的状态。染色过程简便易行，可以快速确定松木内有无线虫。将底面积为0.5cm×0.5cm的木块进行染色，沿垂直树轴的方向切5片(厚度约0.02cm)，统计各木片中的线虫数，并利用SAS软件进行多重比较，发现相邻5片木片中线虫数量无显著差异。该结果将宏观的线虫分布与适用于分子检测的取样技术联系起来。
2、提高了松木中单条松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的PCR检测技术精度，扩增效率提高到100％。具体技术参数如下：将木片(约5mg重)放入灭菌的1.5ml的离心管中，加入2001μl WLB，然后在水浴中完成温度循环：95℃15min，65*C2min，两个循环，加入10山蛋白酶K(20 mg·ml-2)，后65℃1h，95℃15min。裂解后的DNA提取液经过3s柱进行纯化，吸取2μl做模板，进行PCR扩增，PCR反应条件如下：94℃预变性3min；94℃变性45s，53℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸5min。
3、建立了病木“取样-染色-PCR检测”技术体系。该技术推进了病木分子检测技术在生产实践中的应用，为以后开发病木检测试剂盒打下基础。具体技术是：切取相邻的0.5cm×0.5cm×0.02cm五个木片(重约为5mg)，随机取两片染色，镜检确定线虫数量；对于有线虫的木片，将其余三片直接用于PCR检测，只要有一片木片被扩增出松材线虫特异性片段，就表明该样本内有松材线虫。