“时相调节对方”对豚鼠光源性近视化干预的研究

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目的:本课题以视环境中的光源差异为切入点,以药食同源的“时相调节对方”为干预药物,观察实验豚鼠的眼轴、视网膜多巴胺和其D1受体水平,以及D1受体在ON通路的双极细胞中的表达变化,探讨不同光源对豚鼠眼近视化的影响以及“时相调节对方”的干预机制。方法:将40只3周龄的白化雌性豚鼠随机分成5组,每组8只,各组分别为:自然光组、正白LED灯组(简称LED灯组)、仿自然光组及LED食疗组和仿自然光食疗组(两组统称为食疗组)。其中,自然光组放置在靠南面窗户水平距离60cm的架子上,LED灯组和仿自然光组及其食疗组分别放置在相应人工光源的光照下。所有灯具无频闪,光照度调至动物饲养盒中心3501ux左右,且均由定时器调控。实验设定每日光照时间为6:00至18:00,明暗循环交替时间为12h/12h。本实验中,运用时相调节对方对食疗组进行干预,即上午10:00予以午时补阳方饲料、晚上22:00予以子时养阴方饲料进行喂养,对照组豚鼠常规饲养,共12周。在实验前和实验第2、4、6、8、10周对各组豚鼠眼进行眼轴的测量,在第12周时,取各组别的豚鼠视网膜组织,采用液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)测定视网膜多巴胺含量,Western Blot测定D1受体相对蛋白含量及RT-PCR测定D1R mRNA的表达水平,并用免疫荧光技术对各组别豚鼠视网膜在ON型双极细胞中D1R的水平进行测定。结果:1.自然光是连续光谱,波段相对平缓,无明显的峰谷;正白LED灯光谱主要集中在400nm-700nm,并分别在450nm和550-600nm的波长处有一高峰段,480nm左右有一波谷;仿自然光灯光谱范围相对平整,主要集中在450nm-660nm处,在455nm附近有波长峰值。2.光照前各组眼轴测量差异均无统计学意义(p>0.05),实验后各组豚鼠的眼轴结果均在逐渐增长。在光照后的第2周,LED灯组的豚鼠玻璃体腔深度与自然光组相比已出现差异(p<0.05),LED灯组在第4、第6周时的前房深度以及第4周时的眼轴长度均显著增长(p<0.01),随后差异明显缩小。光照10周后,LED灯组豚鼠的眼轴长度大于自然光组(p<0.05),仿自然光组在实验期间较自然光组相比差异无显著性(p>0.05)。在实验第2周时,LED食疗组的前房深度和晶体厚度较LED灯组有所增长(p>0.05),但在第4周时,LED食疗组豚鼠的前房深度有减慢增长趋势(p<0.05),且在第6周时与LED灯组之间的差异增大(p<0.01),在光照第10周,眼轴各项生物测量结果较同光源对照组无显著性差异(p>0.05)。3.光照12周后,LED灯组和仿自然光组视网膜DA较自然光组相比均显著减少(p<0.01),LED食疗组和仿自然光食疗组分别与同光源对照组DA含量相比显著增加(p<0.01)。4.光照12周后,LED灯组和仿自然光组豚鼠的视网膜多巴胺D1受体的相对蛋白含量、D1R mRNA表达都显著少于自然光组(p<0.01),并且仿自然光组中D1受体的表达量大于LED灯组(p<0.05,p<0.01);在予以时相调节对方干预后,与相应对照组相比,LED食疗组和仿自然光食疗组豚鼠视网膜中多巴胺D1受体的相对蛋白水平和mRNA表达均显著上调(p<0.05,p<0.01)。5.在实验第12周时,人工光源环境下的LED灯组和仿自然光组视网膜ON型双极细胞中D1R的表达量均显著下降(p<0.01),各食疗组较同光源对照组相比均有所增加(p<0.05,p<0.01)。结论:1.正白LED灯会加快发育期豚鼠的眼轴延长,向近视化发展。2.ON型双极细胞可能通过减少多巴胺D1受体分泌来抑制多巴胺的释放,从而共同参与豚鼠光源性近视化的进程。3.“时相调节对方”对正白LED灯和仿自然光灯引起的豚鼠光源性近视化有一定延缓作用,可能通过促进ON-BCs中D1R的释放增加DA的表达。4.仿自然光灯较正白LED灯更有助于减慢豚鼠光源性近视化的发展。
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