【摘 要】
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该实验选用复制缺陷的5型腺病毒做为载体,利用大肠杆菌的体内同源重组机制,在原核细胞内构建携带HEV ORF2的重组腺病毒基因组质粒,转染人胚肾细胞(293细胞)后,产生重组的复制
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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该实验选用复制缺陷的5型腺病毒做为载体,利用大肠杆菌的体内同源重组机制,在原核细胞内构建携带HEV ORF2的重组腺病毒基因组质粒,转染人胚肾细胞(293细胞)后,产生重组的复制缺陷的重组腺病毒,然后分别通过鼻腔和腹腔两种途径免疫BALB/c小鼠,初次免疫后于第3、5、7周加强免疫并采样经ELISA检测小鼠的粘膜IgA和体液IgG应答情况.结果,RT-PCR检测表明ORF2蛋白的多克隆抗体特异性结合,而且分子量与预期基本一致.腺病毒经鼻腔免疫小鼠后可刺激机体产生特异性粘膜IgA、血清IgG免疫应答,最高滴度分别为1:50、1:200;经腹腔免疫可刺激小鼠产生IgG免疫应答,最高滴度为1:640,未检测到明显的粘膜IgA应答.可见表达戊型肝炎病毒ORF2的重组腺病毒能有效刺激机体产生免疫应答,经鼻腔途径免疫可以诱导粘膜免疫反应,该实验为以腺病毒为载体的新型戊型肝炎疫苗研究进行了一定的探讨.
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