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目的:应用RAW264.7巨噬细胞固相色谱法解析半枝莲鲜品中的抗炎活性成分,为其质控标准的制订以及临床的合理应用提供实验依据。方法:选择Agilent Extend-C18色谱柱（250 mm × 4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-甲酸水溶液（pH 2.5）,按照梯度洗脱方式进行,流速为0.8 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL,建立半枝莲鲜品HPLC指纹图谱及1 0种黄酮类成分含量测定的方法。建立RAW264.7巨噬细胞固相色谱法:将半枝莲鲜品水提液进行过滤灭菌处理,使其与细胞共同孵育2 h,用D-hank’s溶液（pH 7.2）洗脱5次,洗去未固相化成分,加入解离液（pH 4.0的D-hank’s溶液）,1h后收集,再加入裂解液并收集。通过HPLC法和HPLC-MS法解析、验证解离液中与细胞膜结合的成分以及裂解液中进入细胞的成分,得到准活性成分。应用体外细胞实验验证准活性成分对LPS诱导的巨噬细胞炎性因子分泌水平的影响,并采用分子生物学技术（分子对接）进行佐证,确定半枝莲鲜品的活性成分。结果:建立了新鲜半枝莲的指纹图谱,得到57个共有峰,并指认了10个成分峰,与对照图谱进行比对,确认33号峰为野黄芩苷、42号峰为圣草酚、44号峰为黄芩苷、45号峰为野黄芩素、49号峰为柚皮素、50号峰为木犀草素、51号峰为汉黄芩苷、54号峰为芹菜素、56号峰为黄芩素、57号峰为汉黄芩素。相似度在0.932～0.992之间,平均加样回收率及其RSD分别为91.22%～1 16.75%和0.80%～4.02%。野黄芩苷、圣草酚、黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素、汉黄芩苷、芹菜素、黄芩素、汉黄芩素的平均含量分别为3803.72±1113.96 μg/g、78.25±24.88μg/g、26.06±11.42 μg/g、1179.45±119.83 μg/g、141.22±10.61μg/g、169.00±32.79 μg/g、16.34±5.35μg/g、51.64±8.09 μg/g、5.22±0.62 μg/g、5.65±1.52μg/g,可作为半枝莲鲜品的质控标准。通过RAW264.7巨噬细胞固相色谱法,共筛选了 5个准活性成分,其中野黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素、芹菜素能与细胞膜特异性结合,芹菜素还能够进入细胞内。药效学验证结果显示,5种成分能够不同程度地抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎症因子。其中,野黄芩苷对IL-1β、TNF-α,野黄芩素对IL-1β、IL-6,以及柚皮素、木犀草素、芹菜素分别对IL-6、TNF-α的浓度呈现抑制作用。分子对接结果表明,5个成分分别与相应的细胞因子具有较好的结合能。结论:（1）建立了半枝莲鲜品的HPLC指纹图谱,并测定了10种黄酮类成分的含量。方法学考察结果表示其重复性好、稳定、可行,符合指纹图谱的定性分析及成分的定量分析要求,该法可作为新鲜半枝莲质控标准的参考依据。（2）运用RAW264.7巨噬细胞固相色谱法成功筛选出5个准活性成分,药理效应验证结果初步确定了野黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素和芹菜素是半枝莲鲜品中发挥抗炎活性的效应成分。